肺血管构型重建(structural remodeling)是慢性肺动脉高压的发病基础^［1］,其中心环节是平滑肌细胞的增殖,而平滑肌细胞的增殖依赖多种生长因子的作用,尤其是血小板衍生生长因子(PDGF)。我们通过酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂Quercetin来观察PDGF诱导的肺血管平滑肌细胞(PASMC)增殖及酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响。

资料与方法PDGF-BB,Quercetin,抗磷酸化酪氨酸, 均为美国Sigma产品,流式细胞仪(FCM，型号FACS420,美国BD公司)。

方法用原代培养的初生小牛PASMC,第5～6代用于实验，细胞分组如下：(1)PDGF组：(2)Quercetin处理组(Quercetin+PDGF)；(3)空白组：采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法、流式细胞术(FCM)及免疫印迹法(Western blot)分析技术对PDGF诱导的PASMC增殖及酪氨酸磷酸化蛋白的表达进行分析。

统计学处理：数据以±s表示，组间比较采用t检验。

结果与PDGF组相比,(1)Quer-cetin处理组均能在24、48、72小时明显地抑制PDGF诱导的PASMC增殖(P＜0.01或P＜0.001),作用呈剂量依赖性;(2)FCM分析表明,Quercetin 处理组能显著地抑制PDGF诱导的PASMC细胞周期S期及G₂M期的DNA百分含量(P＜0.01或P＜0.001),阻断细胞由G₀/G₁期向DNA合成的S期转化;(3)Wertern Blot分析显示,Quercetin可显著地抑制PDGF诱导的PASMC酪氨酸磷化蛋白的表达, 尤以85～180 kd明显,Quercetin的抑制呈剂量效应关系。

讨论肺血管构型重建在慢性缺氧性肺动脉高压中的作用近年来倍受重视。PDGF在肺血管构型中的作用近年来也逐渐被认识^［2］，PDGF对PASMC具有很强的致有丝分裂作用，PDGF是通过与其受体结合，激活受体细胞膜内部分的TPK，其TPK可催化靶蛋白分子中的酪氨酸磷酸化，通过细胞内信息传导的共同通道而调节细胞的增殖和分化，因此阻断PDGF作用的关键是阻断TPK的活性。本组结果显示，Quercetin能呈剂量依赖性地抑制PDGF诱导的PASMC增殖的MTT比色反应，阻断细胞由G₀/G₁期向DNA合成的S期转化，Western blot分析显示，Quercetin能抑制PDGF诱导的酪氨酸磷酸化蛋白的表达。Quercetin为黄酮类物质^［3］，它主要通过阻断PDGF受体细胞膜内酪氨酸磷酸化蛋白的表达而使TPK失活，从而使PDGF与受体结合后不能将细胞外信号传递到细胞核内，因而不能调节细胞生长。本组结果表明，TPK抑制剂Quercetin能抑制PDGF诱导的PASMC酪氨酸磷酸化蛋白的表达，从而抑制PASMC的增殖。Quercetin有望应用于肺动脉高压的防治。

参考文献

1Owenlls GK. Control of hypertrophic versus hyperplastic growth of vascular smooth muscle cell. Am J Physiol, 1989, 257:1755-1762.

2车东媛，熊密.肺血管构型重建的特征和形成机制. 基础医学与临床, 1996, 16:17-20.

3Levitzki A, Gazit A. Tyrosine kinase inhibition: an approach to drug development. Science, 1995, 267:1782-1787.

(收稿：1998-02-04修回：1998-06-02)