关键词： 呼吸系统；肺炎支原体；荧光抗体技术

【摘要】目的探讨呼吸系肺炎支原体感染的早期诊断。方法采用免疫荧光法（IFA），检测呼吸系感染患者的上呼吸道脱落细胞肺炎支原体抗原和血清IgM抗体。结果上呼吸道脱落细胞肺炎支原体抗原和血清IgM抗体的阳性率分别为17%和20%，这些患者符合肺炎支原体感染的临床特点。结论上呼吸道脱落细胞肺炎支原体抗原的检测简单易行，可用于呼吸系肺炎支原体感染的早期诊断，同时检测血清IgM抗体可进一步提高诊断的阳性率。

The clinical diagnostic significance on detection of mycoplasma pneumoniae antigen in upper respiratory tract epitheliumWen Zhongguang, Guo Yingjiang, Cui Dejian, et al. Department of Respirology, 304th Hospital, Beijing, 100037

【Abstract】ObjectiveTo investigate the early diagnosis of pulmonary mycoplasma pneumoniae (MP) infection by detection of MP antigen in upper respiratory tract epithelium.MethodA prospective study on respiratory MP infection was conducted in 110 patients with acute respiratory infection from February 1996 to November 1997 in our hospital. Upper respiratory tract epithelia were collected from gargle and MP antigen was detected by immunofluorescent assay (IFA).At the same time, serum samples were taken and immunoglobulin M (IgM)fractions of specific antibody to MP were assessed by the same method in 70 of 110 patients. Moreover, clinical features, cold agglutination test and chest X-ray were also collected for analysis.ResultThe positive rates of MP antigens and IgM antibody were 17% and 20%, respectively, while the titer on cold agglutination test ＞1:8 in only two patients. The clinical features in patients with positive MP antigen and/or IgM antibody were similar to that of pulmonary MP infection.ConclusionExamination of MP antigen in upper respiratory tract epithelium collected from gargle combined with serum specific IgM antibody is a good method for the early diagnosis of pulmonary MP infection.

【Key words】Respiratory systemMycoplasma pneumoniaeFluorescent antibody technic

为了寻找临床呼吸系肺炎支原体（MP）感染快速、实用的诊断方法，我们对110例急性呼吸系感染患者，尝试采用咽部含漱液，检测上呼吸道脱落细胞MP抗原，并对其中70例行血清MP IgM抗体测定。现将结果报告如下。

对象与方法

1.病例选择：110例中男74例，女36例，年龄6～91岁，均为1996年2月～1997年11月在呼吸科和儿科住院的呼吸系感染患者，其中上呼吸道感染12例，急性支气管炎29例，肺炎67例，支气管肺癌伴肺炎2例。所有患者于入院当日或次日晨起留含漱液标本测MP抗原，其中70例同时抽血测MP IgM抗体。全部病例均作痰细菌培养、冷凝集试验、肝肾功能和X线胸片检查。

2.检测方法：(1)上呼吸道脱落细胞抗原片制备：先清水漱口及咽部3次，再用生理盐水15～20 ml咽部含漱3～4秒后吐入烧杯内，2 000 r/min离心15分钟，取沉渣涂片，风干，丙酮固定，4℃保存待测。(2)上呼吸道脱落细胞MP抗原检测：采用免疫荧光法（IFA）进行检测。将适度稀释的MP单克隆抗体（McAB, 军事医学科学院微生物与流行病学研究所制）滴加在抗原片上，湿盒内37℃孵育30分钟，自来水和PBS冲洗，滴加1∶40稀释的羊抗鼠IgG荧光结合物抗体（二抗），孵育、冲洗后荧光显微镜下观察荧光反应，并设阳性和阴性对照。(3)血清MP抗体检测：亦采用IFA法。待测血清1∶10稀释，滴加在预先制备的菌落抗原片上，湿盒内37℃孵育2小时。自来水和PBS冲洗后，加入IgM荧光标识抗体，以后步骤同抗原检测。(4)结果判定：标本的特异性荧光强度用“＋”号表示。荧光呈鲜艳闪亮的黄绿色为“+++～++++”,荧光明亮极易辨认为“++”,荧光较弱但清楚可见为“+”,极弱或可疑荧光为“±”，无荧光为“－”。阴性对照显示“±”或“－”时，标本荧光亮度达“++”为阳性，“+”～“±”为可疑阳性。

结果

上呼吸道脱落细胞MP抗原阳性者19例，占17%(19/110),可疑阳性5例（统计为阴性）。有70例患者留取含漱液和血清两种标本，其中MP抗原阳性13例（19%），IgM抗体阳性14例（20%）,MP抗原和IgM抗体均阳性3例。MP抗原阳性者中63%(12/19)标本留取于起病后6天内，而血清MP抗体阳性者中，71%(10/14)标本留取于起病6天后。

我们将MP抗原阳性和(或)IgM阳性的30例定为呼吸系支原体感染，初步观察其临床特点。本组男18例，女12例，年龄15～91岁。全部均有发热，高热者（体温≥39℃）占47%(14/30),而同期住院痰细菌培养阳性的18例呼吸系感染者（细菌感染组）中61%(11/18)有发热，高热者占33%(6/18)，发热例数显著低于本组(χ²=13.65,P＜0.001)。本组血白细胞＞10.0×10⁹/L者仅占30%(9/30),细菌感染组占83%(15/18)，显著高于本组(χ²=12.80,P＜0.001)。本组咳嗽及干咳症状较明显，重度咳嗽及干咳者分别占63%(19/30)及70%(21/30)，而细菌感染组则均为咳嗽、咳痰。本组仅2例血冷凝集试验滴度≥1∶8。临床诊断急性上呼吸道感染4例，急性支气管炎9例，肺炎17例。应用红霉素治疗18例，罗红霉素和阿齐霉素各2例，氟喹喏酮类4例，其余病例分别用青霉素类和头孢菌素类治疗。除1例并发急性心肌梗塞猝死外，余均治愈出院。

讨论

呼吸系MP感染十分常见，多为社会获得性感染，也有院内感染的报道^［1，2］。病原学方面虽有支原体培养、特异性血清学检查和聚合酶链反应（PCR）等方法，但需要特殊的培养基和设备，操作复杂烦琐，不适用于临床常规检查^［3～5］。国外自1993年始有报道用MP多克隆抗体（PcAb）检测患者呼吸道分泌物MP抗原，阳性率可达86％。在此基础上又建立了单克隆抗体免疫印迹法（McAb），直接检测患者痰和咽试子MP蛋白抗原，发现其敏感性及特异性均很高。我们用简单易行的咽部含漱法分离上呼吸道脱落细胞，用军事医学科学院研制的MP单克隆抗体，以IFA法在110例急性呼吸系感染者中检出17%的阳性者。经我们初步比较，含漱法比咽试子似能获得更多较完整的脱落细胞，且患者无痛苦。筛选出的MP单克隆抗体特异性强，与常见的其它4种支原体（口腔支原体、精氨酸支原体、猪鼻支原体和蔡无胆甾支原体）、3种病毒（腺病毒、副流感病毒和鼻病毒）及军团菌无抗原交叉反应。阳性的19例中标本大部分采集于发病6天以内有助于早期诊断。MP特异性IgM抗体发病后1周左右可检出，10～30天达高峰，12～16周转阴，亦可用于早期诊断。我们也检测了急性期血清IgG抗体,阳性率为23%(16/70)。因IgG上升较晚，且需双份血清对比升高4倍才有诊断意义，故不易用于早期诊断。本组资料还表明，同时检测上呼吸道脱落细胞MP抗原和血清IgM抗体，可进一步提高诊断率，明显优于临床常用的冷凝集试验。

本组30例呼吸系支原体感染以下呼吸道感染为主（87%, 26/30）。患者均有发热，47%有高热，咳嗽症状重，且以干咳为主。大部分患者血白细胞不高，与细菌性肺炎有较明显的区别。MP对大环内酯类和氟喹喏酮类抗生素敏感。本组26例应用这两种药后痊愈。其余病例所用抗生素尚未证实对MP有效，患者预后良好可能与MP感染为自限性疾病有关。

参考文献

1Casalta JP, Piquet P,Alazia M, et al. Mycoplasma pneumonia following assisted ventilation. Am J Med, 1996, 101:165-169.

2Lieberman D, Schlaeffer F, Horowitz S, et al. Mycoplasma pneumoniae community-acquired pneumonia: a review of 101 hospitalized adult patients. Respiration, 1996, 63:261-266.

3刘东旭.肺炎支原体感染检测诊断技术研究近况.国外医学内科分册，1994，21:50-53.

4Falguera M, Nogues A, Ruiz GA, et al. Detection of mycoplasma pneumonia by polymerase chain reaction in lung aspirates from patients with community-acquired pneumonia. Chest, 1996, 110:972-976.

5Cimolai N, Cheong AC. An assessment of a new diagnostic indirect enzyme immunoassay for the detection of anti-mycoplasma lgM. Am J Clin Pathol, 1996, 105:205-208.

(收稿：1998-02-04修回：1998-06-17)

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