材料与方法收集我院和北京市结核病胸部肿瘤研究所外科切除的原发性肺腺癌标本62例存档的蜡块，为常规固定包埋。62例患者男35例，女27例；年龄34～70岁。肿瘤体积5～507 cm³，平均51 cm³。2名医师按1981年WHO分类标准进行组织学分型：腺泡性腺癌38例，乳头状腺癌7例，细支气管肺泡癌14例，实体癌伴粘液形成3例；Ⅰ级分化12例，Ⅲ级分化26例，Ⅱ级分化24例。蜡块分别切片4张，厚5 μm，除HE染色外用标记链霉亲和素-生物素(LSAB)法染色显示p53、k-ras及c-erbB-2癌基因蛋白产物P 53、P 21和P185。一抗及SP试剂盒均为Zymed公司产品。阳性对照用已知阳性的乳腺癌标本，阴性对照用缓冲液替代第一抗体。阳性细胞采用半定量分级。统计学处理：生存资料用Logrank检验，Kaplan-Meier生存曲线及Cox风险比例回归分析。

结果(1)三种癌基因蛋白在肺腺癌组织中的表达情况：P21蛋白阳性表达位于细胞浆内(图1)，表达率为52％。P53蛋白阳性表达定位于细胞核中(图2)，表达率为42%。P185蛋白阳性表达位于细胞膜上(图3)，少部分病例胞膜和胞浆共同表达，表达率为66%。(2)3种蛋白表达与某些预后参数的关系：本组癌基因表达与肺腺癌有关的参数有：P 21蛋白与核分裂指数有明显关系，核分裂指数≥20个/10HP组的表达率为77％，显著高于＜20个/10HP组的45%，两组差异有显著性(P＜0.05)。P21蛋白表达与淋巴结癌转移也有明显关系，有淋巴结转移组表达率为65%显著高于无淋巴结转移组的36%，两组差异有显著性(P＜0.05)。而P53、P185蛋白表达与核分裂指数及淋巴结癌转移的关系差异无显著性(P＞0.05)。(3)三种蛋白表达与患者生存期的关系:通过对62例肺腺癌患者中位生存期的分析，P21蛋白阳性者32例中位生存期为16个月；阴性者30例中位生存期为48个月，Logrank检验二组差异有非常显著性(P=0.001)。伴或不伴P53蛋白表达的患者中位存活期分别为24个月和36个月(P＜0.02)，P185表达与否的中位生存期分别为24和48个月(P＜0.01)。

Cox比例风险回归分析患者的某些临床特征和肿瘤本身特征，其中对延长患者生存期危害最大的因素是P21，每增加一个阳性强度，其相对风险度为2.1倍(P=0.006)。其次是P185，风险度是1.7倍(P=0.04)。P53相对风险度为1.7倍(P=0.058),其影响接近有显著意义。我们还检查了同一肿瘤同时存在二种蛋白表达对患者的影响,发现同一肿瘤二种蛋白同时表达对延长患者存活期危害更大，如P21和P53共同表达相对风险度增至2.4倍(P＜0.004)，P21和P185共同表达相对风险度增至2.3倍(P＜0.003)。

讨论细胞癌变的主要原因是细胞基因组的改变从而影响控制细胞生长和分化基因的正常表达和功能^［1］。激活的ras基因在各种人类癌症是常见的，在人类肺癌主要是k-ras基因，尤其是腺癌显示了较高的k-ras基因表达^［2］。我们用免疫组织化学方法，显示肺腺癌P21蛋白表达情况，其表达率为52%。也证明部分腺癌的发生与ras基因激活有关。

ras基因激活后新生物的生长被触发^［3］，P21蛋白表达率与核分裂指数和淋巴结癌转移有关。在核分裂指数≥20个/10HP组P21蛋白表达显著高于＜20个/10HP组，说明ras表达与肿瘤生长速度快有关。试验还显示，有淋巴结癌转移组P21蛋白表达显著高于无癌转移组，提示ras激活的腺癌更具侵袭性和转移潜能。

关于ras基因表达的预后意义，文献报道与非小细胞肺癌不良预后有关^［4］。但因腺癌病例较少，其预后意义不确定。我们通过多种统计学方法处理，结果显示ras表达的患者存活期短，P21是对延长患者生存期危害最大的因素。

p53和c-erbB-2是各种癌症中较易发生突变的基因。目前关于非小细胞肺癌p53突变意义的报道结果不一致。对其能否作为提示患者预后的指标也存有争议。本试验中P53和P185阳性的患者存活4年以上的比例是23％和46%，明显低于存活4年以下的53％和78%(P＜0.05)。Cox风险比例回归分析结果为P185相对风险度为1.7倍(P＜0.04)，是危害患者生存期的因素。P53相对风险度是1.7倍(P=0.058)，其对患者生存期的影响无显著意义。

正常组织癌变是多种基因异常的结果，如原癌基因的激活抑癌基因的失活等。因此，标记出多种癌基因蛋白对患者存活的影响可能有更大的意义^［2］。我们的研究也表明P21和P53及P21和P185共同表达者对延长患者生存期的危害较P21单独表达者更显著。

图1P21蛋白在肺腺癌中的阳性表达，棕黄色颗粒位于癌细胞胞浆中LSAB法×200图2P53蛋白在肺腺癌中的阳性表达，棕黄色颗粒位于癌细胞核中LSAB法×200图3P185蛋白在肺腺癌中的阳性表达，棕黄色颗粒大多位于癌细胞膜上，少部分位于癌细胞胞浆中LSAB法×200

参考文献

1Rodenhuis S, Slebos RJC. The ras oncogenes in human lung cancer. Am Rev Respir Dis, 1990, 142: 27-30.

2Kern JA, Slebos RJC, Top B, et al. C-erbB-2 expression and code 12 k-ras mutations both predict shortened survival for patients with pulmonary adenocarcinomas. J Clin Invest, 1994, 93: 516-520.

3Westra WH, Slebos RJC, Offerhaus GJA, et al. k-ras oncogene activation in lung adenocarcinomas from former smokers. Cancer, 1993, 72: 432-438.

4Li ZH, Zheng J, Weiss LM, et al. C-k-ras and p53 mutations occur very early in adenocarcinoma of the lung. Am J Pathol, 1994, 144: 303-309.

(收稿：1997-09-30修回：1998-01-15)