采用聚合酶链反应(PCR)技术检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中的结核分支杆菌DNA，并与涂片和培养法比较，以评价PCR检测BALF中结核分支杆菌在肺结核诊断中的价值。

材料81例均为我院已经确诊的门诊及住院肺结核患者。依据结核中毒症状，如低热、盗汗、咳嗽或咯血等，细菌学或病理学检查，结合X线、CT表现及(或)抗结核治疗，随诊3～6个月病灶逐渐吸收而确诊。另选80例本院呼吸病房非结核肺部疾病者作为对照。其中急慢性支气管炎36例，肺炎、支气管扩张各15例，肺癌14例。取所有病例清晨漱口后深部痰液3～5 ml，分别作痰涂片找抗酸杆菌(AFB)、结核分支杆菌培养及PCR检测。两组病例均作支气管肺泡灌洗，取BALF分别涂片查AFB，结核分支杆菌培养和PCR检测。引物及结核分支杆菌PCR诊断试剂盒购自上海复华生物技术开发中心，PCR扩增仪为华美生物工程公司产品。

方法(1)涂片作萋-尼抗酸染色镜检，结核分支杆菌培养及菌型鉴定按照中国防痨协会结核病细菌学检测方法进行。(2)PCR检测：应用结核分支杆菌PCR诊断试剂盒提取标本DNA，按规定方法进行。扩增产物用琼脂糖凝胶电泳分析，紫外线检测仪300 nm下观察，见125 bp扩增带为结核分支杆菌DNA阳性。(3)纤维支气管镜(纤支镜)消毒方法：反复腔内刷洗，腔外擦洗，腔内外大水流冲洗5～15分钟，吹干，2%戊二醛浸泡15分钟，再用75%酒精腔内外消毒，紫外线照射30分钟，并与常规消毒方法作比较。

结果(1)结核组与非结核组痰和BALF三种方法检测结果：见附表。肺结核组患者痰涂片查AFB，结核分支杆菌培养及PCR的阳性率分别为15%、7%及52%，BALF涂片、培养及PCR的阳性率则分别为9%、10%及69%。两组病例的PCR结果分别与同组涂片和培养比较，差异有显著性，x²检验示P＜0.01。BALF PCR阳性率明显高于痰PCR的阳性率，P＜0.05。非肺结核组中痰PCR阳性1例(1%)，BALF PCR阳性2例(3%)，表明PCR有假阳性结果。(2)两种消毒方法结果：为了解在一次镜检后，是否影响下次受检结果，对10例菌阳肺结核镜检后常规消毒后抽吸无菌生理盐水作结核分支杆菌PCR检测，20%(2/10)呈现阳性，10例非结核患者阴性。按本文提供消毒方法亦对10例菌阳肺结核及10例非结核患者镜检后用同法行PCR检测，结果均为阴性。

讨论PCR以其特异、敏感、快速的特点，已成为诊断结核病的重要方法。结果表明，支气管肺泡灌洗液和痰PCR检测结核分支杆菌的阳性率显著高于涂片和培养(P均＜0.01)，且BALF PCR的阳性率高于痰PCR阳性率17%(P＜0.05)。究其原因，是BALF直接取材于病变部位，获得结核分支杆菌的机会增多之故，因此更适合痰菌含量少、肺部病灶局限、未与引流支气管相通、肺结核暂时稳定期的病例，尤其是无痰和少痰菌阴者，且可减少口咽部对标本的污染。纤支镜检查的“激惹”作用和冲洗，使排痰增加，提高痰的阳性检出率，使BALF成为痰涂阴肺结核诊断的一项重要方法。值得注意的是，BALF仍存在假阴性和假阳性问题。一般认为假阴性是由于某种抑制物存在不能扩增，或标本中菌量太少，分布不均，所检部分不含菌或DNA变性之故^［1］。假阳性率一般在3%～20%之间，高者可达77%^［2］。这是因为PCR有极高的灵敏度，无论是死菌、活菌的DNA都可扩增，任何微量污染和不规范操作都可出现假阳性，因此必须隔离工作室，用一次性用具，包括吸头、试管、手套等，消除污染的阳性模板，以把污染减少到最低程度。由于纤支镜是获取标本的直接工具，每作一次都应进行彻底清洗消毒。本文两种消毒法对照结果提示，纤支镜清洗消毒不彻底是出现假阳性的原因之一。我们提出的消毒方法是可行的。

参考文献

1、Shankar P, Manjunath N, Mohankk, et al. Rapid diagnosis of tuberculous meningitis by polymerase chain reaction. Lancet, 1991,337：5-7.

2、Noordhoek GT, Kolk AHJ, Blune G, et al. Sensitivity and specificity of PCR for detection of Mycobacterium tuberculosis, a blind comparison study among seven laboratories. J Clin Microbiol, 1994,32：277-284.

(收稿：1996-12-09修回：1997-04-16)