设为首页
加入收藏
求医中医药网
www.qe.cn
站内搜索
新西兰大白兔，抗α-肌动蛋白抗体(美国ZYMED)，c-fos cDNA(北京中山生物技术公司)，3H-胸腺嘧碇(3H-TdR北京原子能研究所)。取兔气管平滑肌进行原代培养，经抗平滑肌α-肌动蛋白免疫组化验证平滑肌细胞后，取4～6代用于实验。(1)以含
1%胎牛血清(FBS)的DMEM加5-HT氧化酶抑制剂-异烟酰异丙肼(0.1 mmol/L)及抗氧化剂维生素C(0.6 mmol/L)为对照组，其余各组则再分别加入100 nmol/L、1 μmol/L、
10 μmol/L浓度的5-HT；另以含10% FBS的DMEM组作为细胞增殖的阳性组。加入3H-TdR孵育后，测各组放射性核素每分钟闪烁记数值。(2)对照组同上，其余两组分别为再加入10 μmol/L的5-HT组和10%FBS组，经3～6天培养后进行细胞计数。(3)提取各组细胞的RNA，用α-32P标记的c-fos探针进行Northern杂交。
统计学处理采用非配对t检验。
结果 同1%FBS的对照组细胞相比，含不同浓度的5-HT各组及10%FBS组细胞的3H-TdR掺入量显著升高(P＜0.01)。细胞计数亦显示，5-HT组及10%FBS组的细胞数较1%FBS组有显著增加(P＜0.01)。实验还显示，异烟酰异丙肼及维生素C对ASMC的3H-TdR掺入量无影响。在1%FBS的DMEM培养基中，ASMC的c-fos表达水平极低，而加入5-HT或10%FBS1小时后，其表达水平明显升高，其后逐渐回落，2小时后恢复至基础水平。
讨论 有研究显示，哮喘气道平滑肌层的肥厚可能是平滑肌细胞增生的佳果由于10%FBS能显著促进ASMC增生。为了排除血清的影响，本实验采用了1%FBS的低血清培养基。在此条件下，ASMC仅维持活性无明显生长，3H-TdR掺入量恒定在最低水平，但加入5-HT后，细胞的3H-HdR掺入量及细胞数均显著增加，这表明5-HT促进了ASMC增生。在5-HT、10%FBS促ASMC增生时有c-fos的短暂表达。c-fos是一种启动功能的基因，它的表达被认为是细胞增殖分化的重要标志。因此，ASMC的增生最终可能就是通过原癌基因的表达来实现的。
参考文献
1Glassberg MK, Ergul a, Wanner A, et al. Endothelin-1 promotes mitogenesis in
airway smooth muscle cells. Am J Respir Cell Mol Biol, 1994,10：316-321.
收稿：1997-03-05 修回：1997-09-04
