华支睾吸虫病是华支睾吸虫寄生于人体肝胆管内引起，又称肝吸虫病，该病的诊断主要依靠检获虫卵，但因虫卵小或感染度轻、排卵少而易于漏诊，免疫诊断可弥补不足。随着高新技术的发展和应用，显著提高了免疫诊断的敏感性、特异性和诊断效果，其在临床辅助诊断和疫区流行病学调查中的作用越来越突出。现将近年来有关本病免疫诊断的研究进展综述如下。

1特异性抗体的检测

1.1检测用特异性抗原的选择检测抗体的特异性主要取决于所用抗原的特异性，华支睾吸虫诊断抗原的研究，大多限于粗抗原或初步纯化抗原^［1］。

1.1.1华支睾吸虫粗抗原对华支睾吸虫成虫代谢抗原(MA)的化学及免疫学特性分析表明，MA由蛋白质和糖类组成，SDS-PAGE显示MA的分子量为22-128kD,MA与成虫盐水浸液抗原(ASE)和全虫抗原有相同的抗原成分，经免疫扩散(ID)、免疫电泳(IE)、葡萄球菌A蛋白(SPA)—ELISA试验结果表明，MA比全虫抗原有更好的血清学活性，与ASE无显著性差异。用MA免疫家兔能诱导动物产生对感染的抵抗力，但是否有较好的免疫学特性尚有待于进一步观察^［2］。郑葵阳等^［3］以华支睾吸虫成虫抗原(AWA)、尿素溶解性成虫抗原(CWU)和硫酸沉淀成虫抗原(AW)诊断华支睾吸虫病，各抗原间未见显著性差异；但与混合阳性血清反应，AW活性似较AWA和CWU强。

Kim-SI^［4］应用SDS-PAGE/immublot(western blot)技术分析了感染华支睾吸虫的兔血清抗体动态反应，研究表明华支睾吸虫排泄分泌抗原(CSE)的33、27、13和12.5kDa的蛋白区带呈高抗原性，其中13和12.5kDa尚能反应宿主经吡喹酮治疗后免疫反应的衰减情况，即具有疗效考核作用。在SD-PAGE中呈现大量12.5kDa的区带，被命名为华支睾吸虫的“K2-Ag”。该研究者进一步用CSE来检测活动性华支睾吸虫病病人血清相应抗体动态反应，发现30kDa和7kDa区带与患者血清呈强阳性反应，而与吡喹酮治疗6个月后的病人血清反应较弱，其中7kDa未见与卫氏并殖吸虫病、横川后殖吸虫病、华支睾吸虫病患者痊愈后的血清起交叉反应，特异性比30kDa更强，据此认为7kDa抗原可作为活动性华支睾吸虫病的标志性诊断抗原^［5］。国外还有一些研究表明在分离出的200～14kDa的区带中，43、34、28～25kDa作为华支睾吸虫病的诊断抗原值得进一步研究^［6］。这些研究结果可为进一步纯化华支睾吸虫特异抗原提供线索。

1.1.2纯化抗原不少研究表明，经纯化后的抗原组分较粗抗原有更好的免疫诊断价值，国内常用的纯化方法有DEAE-纤维素层析柱、Sephadex-G-200柱、DEAE-cellulose柱、sepharose4B柱层析法，提出UAWA-4B-Ⅰ可能是一种较好的诊断及考核疗效用抗原^［7～9］。Chul等^［10］通过离子交换及凝胶过滤色谱法分离法纯化出一种15kDa的半胱氨酸蛋白酶，该酶与组织蛋白酶B样半胱氨酸酶特性相似，酶联免疫印渍试验(ELIB)显示此酶可用于华支睾吸虫病的免疫诊断。

1.1.3基因工程抗原随着分子生物学技术的发展和应用，其用于 寄生虫特异抗原方面的研究也逐渐增多。关于华支睾吸虫的核酸研究报道尚少，Hong^［11］据已知的华支睾吸虫原肌球蛋白基因序列，经逆转录PCR技术扩增出部分cDNA，并进行克隆和测序，但其免疫学特性尚不明确。

1.2特异抗体的检测方法

1.2.1酶联免疫吸附试验(ELISA)ELISA为80年代以来应用于华支睾吸虫病诊断研究较多的一种血清学诊断方法，由于此项技术血清用量少，操作简便，判断结果容易，又具有较高的敏感性和特异性，是目前符合现场需要的最好免疫诊断方法^［12］。根据经典的ELISA改进的方法有：

1.2.1.1Dot-ELISA该法以硝酸纤维素膜为载体，吸附抗原更稳定，操作周期缩短，试验结果提示用于华支睾吸虫病诊断有高度的敏感性和特异性，是一种微量、敏感的新方法，改用葡萄球菌A蛋白(SPA)替代第二抗体进行Dot-ELISA亦有满意的诊断效果^{［13，14］}。

1.2.1.2ABC-ELISA生物素-亲和素这一生物反应放大系统引入ELISA后，反应强度高于常规的ELISA。汪冰等^［15］研究表明ABC-ELISA的阳性反应强度是常规ELISA的1.31倍，其平均几何强度是SPA-ELISA的1.77倍，特别是用于轻度感染病人低水平抗体的检出优越性明显。

1.2.1.3FAST-ELISA王秀珍等^［16］改进后的ELISA在不降低反应强度的条件下，采用提高反应系统浓度使保温时间缩短，37℃条件下每步反应仅需5min；另外用价廉且吸附性好的聚氯乙烯(PVC)载体代替聚苯乙烯(PS)反应板；用抗人IgG-McAb代替羊抗人IgG，既节约成本又有利于试剂的标准化；用无毒底物四甲基苯胺(TMB)代替邻苯二胺(OPD)，该法与常规ELISA平行对照检测243例病人血清，阳性率分别为96.71%和90.12%，检测正常人血清阴性率为100%和99.2%，提示快速ELISA有实用价值。

1.2.1.4其它改进的ELISA微板法K-ELISA^［8］，凝胶扩散(DIG)-ELISA^［17］，既显示出敏感性高、特异性强等特点，又具有各自的优点供进一步推广应用参考。

1.2.2其它试验以¹²⁵I标记的抗 原用于放射免疫沉淀测定法(RIPEGA)，或以抗原致敏炭粒用于炭粒凝集试验来诊断华支睾吸虫病^［7，18］，均有一定的敏感性和特异性，但前者用同位素来标记和检测，需要一定的保护措施；后者的交叉反应率较高，使得两种方法的应用受到限制。阎岩^［19］应用免疫荧光试验(IFAT)检测特异性IgG抗体，虽快速简便，但敏感性不高；另有用化学发光试验来诊断华支睾吸虫病的报道，实用价值似乎也不大。吴中兴等^{［3，21～23］}连续报道了以免疫金银染色法(IGSS)、Dot-IGSS诊断华支睾吸虫病，敏感性及特异性均高达100%，在用Dot-IGSS检测抗体阳性率为100%时的血清平均稀释度为1∶1656^［24］，表明IGSS，尤其是Dot-IGSS用于华支睾吸虫病的诊断有着良好的应用前景，值得扩大现场试验。

1.2.3抗体型别反应在华支睾吸虫病病人血清中最易检测到的特异性抗体是IgG。Lin-ST^［25］用ELISA分别检测出病人血清中的IgM、IgG、IgA，均呈高度的敏感性和特异性；Hong-ST^［6］的研究表明病人血清中存在与不同kDa区带起特异性反应的Ig(GMA)、IgG、IgE；国内闫玉文等^［26］应用ELISA双抗夹心法测出华支睾吸虫病患者血清总IgE含量为991.14IU/ml，远大于正常人血清中IgE含量251.30IU/ml，证明人体感染华支睾吸虫后血清中的IgE水平有明显增高趋势，亦为本病速发型皮肤试验提供了依据。

2特异性抗原的检测

2.1检测用特异性抗体的选择常规取华支睾吸虫抗原免疫动物，制备的血清抗体是多种多样的，即多克隆抗体，其能特异性识别多种抗原决定簇，用于华支睾吸虫抗原检测易引起非特异性假阳性反应。近年来，杂交瘤细胞技术已成功地应用于寄生虫学的诊断、抗原定位、抗原分子结构研究等方面。单克隆抗体能提高抗原检测的特异性，Yong-TS等^［27］筛选出华支睾吸虫特异性单克隆抗体McAb-C605-23，用于血清学诊断特异性强，并用该单抗鉴定出华支睾吸虫成虫粗提抗原相应的抗原决定簇成分为糖类。潘赛贻等^［28］制备并获得了5株分泌高滴度抗华支睾吸虫成虫单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其分泌的抗体与日本血吸虫抗原、卫氏并殖吸虫抗原、猪囊尾蚴抗原均不发生交叉反应，用间接免疫荧光试验(IFAT)进行单抗识别，抗原定位于华支睾吸虫的肠管壁，表明其制备的单克隆抗体具有较高的特异性，为诊断华支睾吸虫病活动性感染及考核疗效开拓了新途径。

2.2特异性抗原的检测

2.2.1血清循环抗原检测检测循环抗原理论上较检测循环抗体更能提供早期诊断、活动性感染诊断、感染负荷测定、疗效考核等信息，但由于华支睾吸虫寄生于肝胆管内，推想存在于宿主血清中的抗原物质水平不会很高，且循环抗原可与相应的抗体形成免疫复合物被宿主清除，不易检出^［29］，虽有报道用ELISA双抗夹心法及抑制性ELISA法检测华支睾吸虫病患者血清中循环抗原取得满意结果^{［30，31］}，但其重现性有待进一步证实。

2.2.2粪便抗原检测曾有报道用对流免疫电泳(CIE)检测患者粪便中的特异抗原，但敏感性(69%)与特异性(84.4%)均不高^［32］；刘宜升等^［33］采用ABC-ELISA双抗夹心法检测感染华支睾吸虫的兔粪便中肝吸虫抗原(CSAg)，能测出CSAg的最低含量为0.045μg/mlPBS，且CSAg含量与感染兔的虫荷呈直线正相关，研究结果表明检测粪便中抗原不但能客观地反映感染情况，而且取材方便，不用采血，若进一步制备高效价、高特异性抗体，提高方法的敏感性和稳定性，将比检测血清中抗体和抗原更具有实用价值。

3参考文献

1.裴福全.华支睾吸虫病诊断抗原研究进展.中国寄生虫学与寄生虫病杂志，1998，16：304.

2.崔巍，王尊哲，黄红，等.华支睾吸虫成虫代谢抗原的化学及免疫学特性的研究.中国寄生虫病防治杂志，1992，5：29.

3.郑葵阳，杜文平，郑霞，等.三种抗原用于斑点免疫金银染色试验(Dot-EGSS)诊断华支睾吸虫病的研究.中国人兽共患病杂志，1993，9：25.

4.Ki