关键词： 钩端螺旋体；L 型；脑动脉炎

摘要目的探讨钩端螺旋体 L 型感染与钩体脑动脉炎发病的可能关系。方法对74例钩体脑动脉炎患者血液及脑脊液进行钩端螺旋体普通培养、L 型培养，患者血清做显微镜凝集试验，用免疫荧光染色确定钩体 L 型及其原菌型。结果钩体脑动脉炎患者钩体L型培养、普通培养、钩体 MAT的阳性率分别为：47.3%、18.9%、70.3%。分离出的钩体 L 型呈多形性。结论钩端螺旋体 L 型感染与钩体脑动脉炎的发病关系密切。

RELATIONSHIP BETWEEN LEPTOSPIRA L—FORMS AND

LEPTOSPIRA CEREBRAL ARTERITIS

Jiang Zhenyou Lin Chen Jiang Huihe Luo Weizhong Li Yingxing

(Department of Microbiology and Immunology,Jinan University Medical College,Guangzhou 510632)

ABSTRACTAimTo study the relationship between leptospira L-forms and leptospira cerebral arteritis.Method Leptospira L-forms and original forms were isolated from blood and spinal fluid of patients with leptospira cerebral arteritis,in liquid L-from media and Korthof.media.Blood of patients was detected by Microscopic agglutination test(MAT).L-forms had been identified with immunofluorescence.Result It showed that the positivity rate of the infection of leptospira L-forms was 47.3%;the original forms was 18.9%;the positivity rate of the MAT was 70.3%.Leptospira L-forms in smear under light microscopy were shown to be highly pleomorphic.Conclusion It suggests that leptospira L-forms should be correlated with leptospira cerebral arteritis.

KEY WORDSLeptospira L-forms Cerebral arteritis

钩端螺旋体病(钩体病)是钩体感染引起的一种严重的自然疫源性急性传染病，临床表现多样，少数患者在临床症状消退后半年内发生以中枢性肢体瘫痪、失语及视力减退或失明为突出表现的神经系统后发症。钩体病后发脑动脉炎是钩体感染最多见而严重的脑血管病后发症，其发病机理尚未完全清楚^［1］。作者对74例临床诊断为钩体脑动脉炎患者血及脑脊液进行钩体普通培养、L型培养和钩体 MAT，旨在探讨钩体 L 型感染与钩体脑动脉炎的关系。

1材料与方法

1.1病例患者来自钩体病流行区，有疫水或疫源接触史，血清钩体 MAT 阳性(效价＞1:100)。或有过急性钩体感染史，临床表现符合脑血管病变特点，排除其它原因。

1.2菌种钩体波摩那型(56608)、黄疸出血型(56601)、犬型(56603)、秋季热型(56606)、流感伤寒型(56609)、七日热型(56610)，由中国药品生物制品检定所提供。

1.3临床患者标本钩体普通型和 L 型的分离钩体 L 型培养基成分与制备方法参见文献^［2］。临床诊断为脑动脉炎的患者血及脑脊液接种 Korthof 培养基和钩体 L 型液体培养基中、28℃培养、隔日观察至3周。

1.4分离 L 型菌株形态的观察与鉴定暗视野检查、涂片革兰染色镜检观察形态。免疫荧光法鉴定其菌种及其原菌型。

1.5钩体 MAT患者血清56℃灭活30min，取常见6型钩体流行菌株做钩体 MAT。

2结果

2.1临床分离的钩体 L 型及普通型脑动脉炎患者血液或脑脊液经钩体 L 型液体培养基培养1周后见有多形性，主要表现为球状体、丝状体及短杆状、巨形体、末端呈钩状。延长培养时间，则丝状体延伸拉长，有时互相缠结。35例钩体 L 型培养阳性(47.3%)，其中28例从血液、10例从脑脊液分离出。血和脑脊液同时分离出 L 型3例。14例患者血钩体普通培养阳性(18.9%)，其中钩体 L 型培养同时阳性5例。

2.2鉴定钩体 L 型暗视野观察呈多形性，革兰染色为阴性。用抗钩体分型血清对分离的 L 型作免疫荧光染色，见长丝体与巨形体均呈阳性反应，其中波摩那型26例、黄疸出血型6例、秋季热型2例、犬型1例。

2.3钩体MAT74例脑动脉炎患者血清钩体 MAT 阳性52例(70.3%)。30例钩体普通培养与 L 型培养均呈阴性的患者钩体 MAT 阳性为 20 例。35例钩体 L 型培养阳性患者中，血清 MAT 效价1∶100为6例、1∶200为14例、1∶400及以上为5例、10例钩体MAT 阴性。9例钩体普通培养阳性(L 型培养阴性)患者中，血清 MAT 效价1∶100为1例、1∶200为2例、1∶400及以上为4例、2例阴性。

3讨论

随着细菌 L 型研究工作的广泛开展，越来越多的研究资料表明，有些疾病与细菌 L 型有关^［2］。汤郡等^［3］实验证明在感染钩体豚鼠的脑实质和脊髓组织有钩端螺旋体 L 型存在，脑血管壁上嵌有许多末端膨大成双球状体的钩体 L 型。钩体 L 型与细菌 L 型一样有圆球体，巨形体，长丝体。钩体缺壁形成L型后，易受环境特别是低渗透压的影响而破裂，故临床需用高渗培养基分离钩体 L 型。Pickens^［4］等用荧光显微镜证实球状体与典型螺旋体的抗原性相似，两者与标记的免疫血清反应完全相同。Mattman^［5］等认为体内螺旋体 L 型仍保留部分细胞壁抗原而使荧光抗体染色成为可能。我们用间接免疫荧光技术检查临床分离的钩体 L 型发现长丝体与巨形体均呈阳性反应，对照霍乱弧菌阴性，证明分离菌株确系钩体，其原菌型以波摩那型为主，与本地区流行菌株一致。钩体变为 L 型后荧光染色亮度不强，可能是变成 L 型后因细胞壁缺失而致抗原性减弱。我们认为钩体 L 型菌型鉴定采用免疫荧光及免疫酶染色比钩体 MAT 试验敏感，只要有极少量细胞壁成分残留即呈阳性而得到鉴定，且钩体 L 型由于形态多形性常自然凝集缠绕成团不宜做 MAT。

钩体变为L 型由于失去细胞壁，刺激机体产生抗体的能力降低，故钩体L 型培养阳性的病人钩体 MAT 效价可以较低，甚至阴性，提示钩体 MAT 效价低的患者钩体 L 型培养的重要性。

实验研究证明青霉素在动物体可诱导钩体形成 L 型，我们认为临床上不恰当的青霉素应用可能造成钩体 L 型形成。钩体发生 L 型变异后，如同细菌 L 型仍具有一定的致病性^［6］，其细胞壁比原菌厚3倍^［7］。细胞壁缺损其抗原性减弱，这可能是 L 型能在机体内抵抗免疫因素，逃避免疫系统攻击而长期成活引起神经系统后发症的原因。

4参考文献

1.于恩庶，罗海波，鲍行豪等主编.钩端螺旋体病学.第2版，北京：人民卫生出版社，1992，320～330.

2.黄谷良,林特夫编著.细菌 L 型与疾病.北京：学苑出版社，1991：373.

3.汤郡,黄谷良,林特夫,等.钩端螺旋体 L 型、诱导及其形态学观察.蚌埠医学院学报，1993，18(1)：3.

4.Pickens E G,Burgdorfer,W.J Bacteriol,1968,95:291.Spirochete from the rabbit tick,Haemaphysalis leporispalustric(Packard).I.Isolation and preliminary characterization.

5.Mattman L H.Cell wall deficient forms,CRC Press,Cleveland,1974:213,190.

6.林特夫,张世馥,马登宏,等.钩端螺旋体 L 型稳定株致病性的实验研究.中国人兽共患病杂志，1997，13(5)：9.

7.林特夫,宋秀宇,唐素兰,等.钩端螺旋体稳定 L 型的形态与超微结构的研究.中华微生物学和免疫学杂志，1997，17(3)：192.

1999年1月2日收稿1999年2月27日修回