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南宁市家犬钩端螺旋体病的调查及病原分离和菌型鉴定

2022-07-29
来源:求医网
犬属动物是钩端螺旋体的易感动物。在人、畜钩端螺旋体病的流行病学方面,有着重要的意义。家犬与人、畜相处密切,在一个特定的地区内,查清家犬对钩端螺旋体的感染程度和带菌状况,对诊断和防制人、畜钩端螺旋体病方面,有着很大的帮助。为此,我们在南宁市某个体宰杀家犬的屠场,进行了病犬的临床症状和组织器官的病理变化观察,并取血作钩端螺旋体病的血清学试验,取肾作钩端螺旋体的纯菌分离和菌型鉴定,结果报告如下。

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1调查家犬的来源南宁市黄××和肖××等狗肉贩子,从南宁市近郊的农村饲养的家犬(本地土种,自由放养)收购,转运到市内某地圈养(体重约8—15kg),陆续的不定期宰杀后出售。

1.1.2血清和脏器的采集待杀狗放血时,用15mm×120mm的试管盛血5~7ml,放成斜面,置冰箱中,释出血清后,倒至链霉素瓶内,存於4℃下备用。待开肚后,取肾放於消毒的铝制饭盒内,存冰箱备用。

1.1.3培养基本实验自配的柯索夫培养基盐类基础液,所用化学药品,均为AR和CP产品。兔血清系本所动物饲养室饲养的1.5—2kg的健康家兔,心脏取血,分离血清,存於冰箱备用。

1.1.4抗原本实验室传代的国内常用的13群15型钩端螺旋体活培养物。

1.1.5抗血清购自中国药品生物制品检定所,13群15型抗血清。

1.1.6稀释液自配的PBS,高压灭菌后,存於室温。

1.2试验方法

1.2.1临床症状和解剖病变的观察结合犬群饲喂时,逐个观察其精神,食欲、体温、大小便及结膜等的变化情况。

宰杀后,犬尸开肚时,检查各腔器的病理变化,并记录之。

1.2.2病犬血清检查钩端螺旋体显微凝集试验:抗原系用如下的常见血清型:出血黄疸型(L.icterohemorrhagia)、波摩舒型(L.pomona),犬型(L.canicola),秋季热型(L.autumnlis),流感伤寒型(L.grippolyphosa),澳洲型(L.australis),尿型(L.hyos)等7个菌型的菌株活培养物。

待检血清稀释从1∶50开始倍比稀释至1∶1600,同时设立对照。

试验:取各个稀释度的血清稀释液,分别放入7排康氏试管内,每管0.1ml,然后加入活菌抗原(检定合格的)0.1ml,摇匀,37℃下作用120分钟,取出涂片,用暗视野显微镜观察,凡半数以上菌体凝集成团者,即为阳性()。

1.2.3钩端螺旋体的分离培养及其鉴定取病犬肾,以无菌操作法,截其皮质一小块(似米粒大),投于柯索夫培养基内,放28~30℃下培养:至10、20、30、45天,分别涂片,暗视野显微镜检查,若发现有钩端螺旋体,立即转接于新鲜的KorThof培养基内,使其继续稳定地生长。若发现有钩端螺旋体,同时又被什菌污染时,可用生物滤过法处理,获得纯培养。钩端螺旋体菌型鉴定,按常规进行。

2结果

2.1病犬的临床表现共检查301只家犬,其中131只表现消瘦、萎靡,结膜潮红,羞明、流泪,被毛松乱,食量少,有的呕吐,拉稀便,尿黄。体温超过40℃72只。宰杀后检查124只,其中脾、肾、心、胃、肠充血出血的69只。

2.2检查病犬血清301份,其中Pomona型阳性的17份占5.6%;Canicola型阳性的18份,占5.9%;Icterohemorrhagiae型阳性的2份,占0.66%;Grippolyphosa型阳性的2份,占0.66%;Autumnalis型阳性的2份,占0.66%;同一个血清,与Canicola和Pomona阳性的3份,占1%。

2.3采集犬肾标本301份,进行分离培养,结果184份肾样本接种物污染杂菌,实际有效培养数为117份。其中3份肾样本培养出钩端螺旋体。

2.4病犬肾样本中,分离到3株钩端螺旋体经鉴定为L.canicola。

3讨论

文献报道和我们的试验结果表明,有的家犬感染钩端螺旋体后,症状典型,有的感染后,症状轻微或不表显症状而成为隐性带菌者,因此这一类型的患犬,对人、畜钩端螺旋体病的发生和传染,危险性更大。

检查301只家犬,有症状表现的131只占43.5%;组织器官有病变的69只,占22.9%,但血检总阳性率为14.6%,出菌率为2.6%,从而表明,还有病犬是其他疾病引起的,提示:家犬不但是人、富钩端螺旋体病的传染来源之一,而且也是其疾病的传染来源之一。

血清检验结果表明,调查的家犬感染L.Pomona的5.6%;L.canicolo占5.9%;autumnalis占0.66%;L.ieterohemorrhagine占0.66%;L.grippotyphoso占0.66%;同一血清与L.pomona和L.canicola阳性的占1%,从这结果表明,南宁市家犬钩端螺旋体病原是复杂的。

据文献报道,家畜钩端螺旋病表现为衰竭、高热、厌食、肾炎、肠炎和出血性素质的病理变化,我们此次在病犬中观察到的情况与文献报道是相似的。另家犬钩端螺旋体病,主要是L.Canicola引起,部份是Icterohemorrhagiae引起,也有报道Pomona型可引起。我们此次在病犬中分离的3株,经鉴定为L.canicola,这与文献报导是一致的。

4参考文献

1.Alston J M,and Broom J C.Leptospirsis in men and animal.Chapter XVI,1958.

2.侯崇昌等.广东钩端螺旋体病动物宿主进一步调查.中华医学杂志,1958,43,603.

3.邓沛霖等.猪钩端螺旋体病的初步调查.广西兽医研究所内部资料 1986.12.

4.曾铬珠等.幼犬感染致病性钩端螺旋体试验.广西兽医研究所内部资料.1986.12

本文得到李秉鸿老师帮助,致谢)

1998年11月17日收稿