关键词： 解脲脲原体；慢性前列腺炎；PCR技术

摘要本文对60例非细菌性的慢性前列腺炎患者的前列腺液用PCR和培养法同时进行解脲脲原体的检测，结果显示：PCR技术的阳性率为15.0％，培养法的阳性率仅为6.7％；20例正常人对照组均为阴性。两组差异显著(P＜0.01)。该结果还表明，PCR技术检测前列腺液中解脲脲原体的方法简单、特异，可替代培养技术，并可作为解脲脲原体病原学检查和疗效考核的监测手段。

STUDY ON CORRELATION OF CHRONIC PROSTATITIS

AND UREAPLASMA UREALYTICUM

Zhou MoShao Qiang Zhang Yueqing Zhang Yuhai

(Beijing Tropical Medicine Research Institute，Beijing 100050)

ABSTRACTPCR and cultivation detection for Ureaplasma urealyticum in prostatic secreta of 60 patienes with nonbacterial chronic prostatitis were carried out simultaneously.The positive rate of PCR was 15.0％ and the positive rate of cultivation was only 6.7％.Twenty normal healthy subjects were used as control and all showed negative.The difference between the chronic prostatitis and the normal controls was statistically significant (P＜0.01).The results also showed that PCR was a specific and simple method for detection of Ureaplasma urealyticum in prostatic secreta PCR would replace cultivation as monitoring instrumentalily of etiological examinition and therapeutic evaluation of Ureaplasma urealyticum infection.

KEY WORDSUreaplasma urealyticumChronic prostatitisPolymerase Chain Reaction

慢性前列腺炎是泌尿外科常见病、难治病。其发病率在我国城市医院中占泌尿外科就诊男性患者人数的25%～30％，在我国农村为21.3％，多发于20-40岁的青壮年。目前慢性前列腺炎诊断较容易，但治疗效果欠佳，主要原因是病原学未明确，特别是非细菌性前列腺炎，至今尚无定论。解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum)目前已被证明是非淋病性尿道炎常见且主要的病原体，但是否引起慢性非细菌性前列腺炎还有争论。本研究应用PCR技术检测慢性前列腺炎患者前列腺液中的解脲脲原体，同时以正常人作对照，从而研究解脲脲原体与慢性前列腺炎的关系，结果报告如下。

1材料与方法

1.1临床资料

1.1.1实验组从泌尿外科门诊随机选择具有慢性前列腺炎症状，且尿道常规检查正常，病程在3个月以上的男性患者60例，年龄在20～61岁，平均33.8岁。

1.1.2对照组随机选择无前列腺疾病症状，无泌尿系感染症状，且尿液常规检查和前列腺液常规检查均正常者20例，年龄在25～62岁，平均31.7岁。

1.2标本的采集两组均常规消毒阴茎和尿道外口，实验组在前列腺按摩前用消毒的尿道拭子插入尿道内2～3cm，轻轻转动后取出，立即分别插入无菌培养瓶中和装有500μlTE缓冲液的DNA提取瓶中。然后经直肠前列腺按摩获取两组受检者的前列腺液，将标本按下列方法处理：

1.2.1一部分前列腺液做常规检查；

1.2.2一部分前列腺液放入无菌培养瓶中，以备细菌学培养；

1.2.3一部分(约0.2ml)溶于0.5ml TE缓冲液的DNA提取瓶中；

1.2.4部分(约0.2ml)立即放入解脲脲原体培养瓶中，以做该病原培养。

1.3解脲脲原体培养本实验采用北京华美生物工程公司生产的解脲脲原体培养试剂盒，加入0.2ml前列腺液后立即置37℃温箱培养，培养6h后开始观察液体颜色变化，凡培养液由黄色变红色者为阳性。经72h培养仍未变色者为阴性。每次均与阳性作对比。

1.4解脲脲原体PCR反应本实验采用中国科学院北京科海医疗生物工程公司研制的解脲脲原体PCR试剂盒。其扩增反应条件：94℃预变性2min，再行扩增循环。94℃DNA变性45sec，52℃退火45sec，72℃延伸45sec，共35个循环。在循环完毕后，在72℃延伸5min。取10μl扩增产物在2％琼脂糖凝胶上电泳，30min后在紫外灯下观察，若出现225bp特异性条带即为阳性。每次试验均设有阳性和阴性对照。

2结果

2.1前列腺液镜检结果

2.1.1实验组在60例患者中前列腺液白细胞计数大于10个／HP者16例，5～10个／HP者19例，小于5个／HP者23例。

2.1.2对照组前列腺液镜检白细胞小于5个，有大量的卵磷脂小体，均为正常。

2.2前列腺细菌学检查结果

2.2.1实验组本组60例均同时行尿道分泌物与前列腺液细菌学培养。有14例前列腺液培养出细菌，发生率为23.3％。其中表皮葡萄球菌9例，大肠杆菌3例，金黄色葡萄球菌1例，肺炎克雷伯氏菌1例。

2.2.2对照组前列腺液细菌学培养均为阴性。

2.3前列腺液PCR检测和解脲脲原体培养结果

2.3.1解脲脲原体PCR检测结果

2.3.1.1实验组60例患者中，前列腺液PCR检测阳性9例，阳性率为15.0％，其中前列腺液中白细胞计数大于5个／HP者共7例(7／35，20％)，小于5个／HP者2例(2／25，8％)。

2.3.1.2对照组20例均未出现特异性条带，均阴性。

从上述结果所显示的阳性率来看，二组具有非常显著性差异(P＜0.01)。

2.3.2解脲脲原体培养结果对实验组60例患者的前列腺液同时进行解脲脲原体培养，培养结果仅4例阳性，而这4例阳性者PCR检测结果也均为阳性。从而说明PCR检测的敏感性高于培养。

2.3.3尿道分泌物的PCR检测结果实验组60例的按摩前尿道上皮细胞进行解脲脲原体PCR检测，结果均为阴性，说明前列腺液PCR检测出的解脲脲原体来源于前列腺，并非来源于尿道。

3讨论

慢性前列腺炎是泌尿生殖系统的常见病和多发病。其中慢性非细菌性前列腺炎病原学的确定非常困难。目前已确定沙眼衣原体是慢性前列腺炎的病原体之一。而其它病原体尚未确定。有些学者认为解脲脲原体是慢性非细菌性前列腺炎病原体之一，其阳性率为14%～30％，但由于培养方法敏感性差，故应用不多。在前列腺液中用PCR技术检测出解脲脲原体尚未见报道。

本研究成功地采用PCR技术检测出前列腺液中的解脲脲原体，其阳性率为15.0％，结果与文献报道相同^〔1～8〕，而且均发生在慢性非细菌性前列腺炎患者，前列腺液白细胞计数大于5个／HP以上者阳性率20％。对照组的前列腺液PCR检测均为阴性。此结果提示解脲脲原体能引起前列腺内感染，而且不同时存在前列腺内细菌感染。前列腺液及按摩前尿道脱落上皮细胞同时进行解脲脲原体PCR检测，9例前列腺液解脲脲原体PCR阳性者，而尿道上皮细胞PCR检测结果均为阴性，说明前列腺液中的解脲脲原体只来源于前列腺内，而非来源于尿道内。

本研究同时进行PCR法和培养检测，其结果证明PCR技术的敏感性与特异性。9例阳性患者中1例服美满霉素100mg／日，3个月后复查PCR为阴性，而且症状消失。采用PCR检测前列腺液中解脲脲原体的方法不仅为临床上诊断解脲脲原体性前列腺炎提供了一个特异性、简单的诊断方法，并且可替代培养法技术，同时也可作为解脲脲原体感染治疗的监测手段。

4参考文献

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1998年10月26日