1材料与方法
1.1气象及疫情资料由当地气象、卫生防疫部门提供。
1.2标本采集
1.2.1血清采集采集242份发热病人血液(发病7天内的急性期患者血液分作2份,其中1份作病原分离用),分离血清,低温保存备用。
1.2.2宿主及媒介的采集在各疫点捕鼠,并收集鼠耳壳内的恙螨。
1.2.3抗原Karp、Kato、Gilliam三型抗原片由卫生部北京生物制品研究所提供。
1.2.4抗体羊抗人、羊抗鼠IgG荧光抗体分别由四川大学和北京生物制品研究所提供。
1.2.5小白鼠取自本所实验动物室。
1.3病原分离及鉴定
1.3.1病原分离将急性期患者血液、鼠脾脏、恙螨等分别研磨后加蔗糖PG液制成适当浓度的悬液,腹腔接种小鼠各3只,每只0.5ml。当小鼠发病于濒死时解剖取脾脏、腹水传代,同时作涂片,Giemsa染色,镜检。以上病原分离阳性者制备小鼠免疫血清。
1.3.2血清学检测采用微量间接免疫荧光法,将血清稀释后滴于抗原片上,置湿盒37℃30′,用PBS洗涤3次,吹干后加相应的IgG荧光抗体,再置湿盒37℃30′,然后用PBS洗涤3次后吹干镜检。判定标准参照F.Bozeman氏法〔1〕。
2结果
2.1病原分离
从12组接种材料中分离到5株立克次体(其中,2株分离自病人血、2株分离自黄胸鼠、1株分离自褐家鼠)。它均能在8~12天内致死小鼠。病死的小鼠都有不同程序的皮下充血、腹水和脾肿大。涂片经染色后在单核细胞浆内外可见到立克次体颗粒。鼠免疫血清经分型鉴定后有3株为Karp型,1株为Gilliam型,另1株为Karp+Gilliam混合感染型。
2.2血清学检测
对242份病人血清进行检测,结果阳性95份,阳性率39.2%。分型结果为Karp型61份,占64.2%。Gilliam型21份,占22.1%,K+G混合型12份,占12.6%,K+T型1份,占1.1%。没有Kato型。
2.3流行特征
从1992年起,宾川县就有恙虫病病例报告,1994年1月~10月该县共发生疑似恙虫病病例600多例,主要表现为发热、淋巴结肿大,部分患者可见皮疹和溃疡。发病无明显性别差异,但以儿童和农民多见。病例多集中在7月至9月间(占70%)。该县月平均气温从5月开始升高(24.8℃),至9月下降(23.4℃),月平均相对湿度8月最高(88F),9月开始下降(70F)。发病率的高低与气温、相对湿度密切相关。
3讨论
本次调查,从当地宿主动物和病人血液中均分离出恙虫病立克次体,表明此次属一起恙虫病暴发流行。分析认为,黄胸鼠是当地恙虫病自然疫源地主要的动物宿主,褐家鼠次之。据报道,地里纤恙螨是我省恙虫病的主要传播媒介〔2〕。但本次未从恙螨中分离到立克次体,可能因为标本数少的缘故。
血清学分型结果表明,宾川县恙虫病立克次体流行株主要是Karp型,其次为Gilliam型,该县病人血清分型亦以Karp型为主,占64.2%,Gilliam型次之,与冯锡光等〔3,4〕的调查结果相一致。应用免疫荧光法对血清进行抗体检测,具有特异、敏感、节省和快速的优点〔5,6〕。
气象资料显示,该县夏秋季的月平均气温和月平均相对湿度较适且于恙螨的生长繁殖,这是典型的夏秋型恙虫病流行。近年来,恙虫病流行范围波及面越来越广,在一些地区,由于人们对其了解少,误诊率也高,应引起重视。
本次调查首次从病原学和血清学证实宾川县为恙虫病地方性流行性,为该县恙虫病的监测和防治提供了科学依据。
4参考文献
1.Bozemam FM,et al.Serological diagnosis of scrub typhus by indirect immuno-fluorescence.Proc Soc Exp Biol Med 1963,112:258.
2.陈渊民,等.云南恙虫病流行病学分析.中华流行病学杂志编辑部.立克次体病与衣原体病专辑,1981.
3.陈渊民,等.云南恙虫病立克次体血清型.中国人兽共患病杂志,1997,13(1):13.
4.冯锡光,等.云南省宾川县恙虫病立克次体血清学分型研究.地方病通报,1997,12(1):38.
5.张海莲,等.应用micro-IF进行恙虫病立克次体血清学分型.立克次体衣原体弓形体专辑.中华流行病学杂志编辑部,1983,65.
6.娄丹,等.立克次体病血清学诊断试剂盒应用的评价.中华流行病学杂志,1989,10(特刊3号):44.
1997年12月6日收稿1998年3月27日修回
