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肺孢子虫病原学检查的一种快速染色方法

2022-07-29
来源:求医网
在肺孢子虫病原学检查中,常用的方法有姬姆萨(Giemsa)染色、亚甲胺蓝染色(toluidine blue stain,TBO)、哥氏亚甲胺银染色(Gomori's methenamine silver nitrate stain,GMS)〔1〕。姬氏染色简便、快速,囊内小体呈紫红色,囊壁不着色,但周围组织也染上同样颜色,缺乏对比,易漏检。TBO染色特点是囊壁染成蓝紫色,囊内小体不着色,背景、组织碎片也染成淡蓝色。GMS染色使包囊壁呈棕褐色,部分包囊内可见到括弧样特征结构,此法准确、特异性强,可作为确诊依据,但耗时太长,操作复杂。

作者在实践中,根据有关文献〔2、3〕摸索设计了一种快速的银染方法,具有简单快速、特异性强的优点,且耗时仅需10余min。

预先配制工作原液:以100ml3%六次甲基四胺银加5ml5%硝酸银。临用时按25∶25∶2(V/V)比例把工作原液、水、5%硼砂配成GMS工作液。

具体染色步骤如下:

1.滴5%铬酸覆盖肺印片(或肺抽出液涂片,火焰上加热1min,至出现蒸汽为止);2.流水冲洗1min;3.浸入1%亚硫酸钠1min;4.流水冲洗2min;5.滴GMS工作液覆盖肺印片,火焰上加热至出现棕黄色;6.流水冲洗1min;7.浸入2%硫代硫酸钠1min;8.流水冲洗约3min;9.吹干,油镜下镜检。

经本法染色后的肺孢子虫包囊呈棕褐色,油镜下可见包囊呈圆形、椭圆形或月牙形,部分包囊内有棕褐色的括弧样结构,容易观察。染色过程应注意颜色深度,若染色过深,不易将肺孢子虫包囊与真菌区分。此法尤其适用于临床标本快速确定有无肺孢子虫病原的检查,应予以推广。

参考文献

1.刘约翰,等主编.寄生虫病临床免疫学.重庆:重庆出版社,1993.146~147.

2.Churukian CJ,Schenk EA.Rapid Grocott's Methenamine-Silver Nitrate Method for Fungi and Pneumocystis carinii.Am J Clin Pathol,1977,51:427.

3.陈佩惠,等主编.人体寄生虫学检验技术.北京:科学出版社,1988.71.