病毒感染与小儿肾病关系在国内外存在不同意见和观点。我们应用聚合酶链反应(PCR)对224例小儿肾病患者血清及肾组织中乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、EB病毒(EBV)和巨细胞病毒(CMV)进行了检测，以期了解和探讨这些病毒在小儿肾病中的致病作用及意义。

一、研究对象和方法

1.研究对象：随机选择自1990年本科住院经肾穿刺活检确诊的肾小球肾炎患儿224例，其中男性122例，女性102例，年龄1.2～14岁。所有患者肾活检组织经福尔马林液固定，石腊包埋切片，进行病理学检查。

2.方法：肾活检组织经生理盐水洗三次后福尔马林液固定，石腊包埋，从包埋组织块切取约5 μm的薄片，经二甲苯脱蜡，无水乙醇漂洗，沉淀晾干后加入100 μl消化液，50℃水浴2小时，最后100 ℃煮沸10分钟，12 000 r/min离心5分钟，取上清用于PCR扩增。根据检测病毒的不同需要设计引物，由北京赛百盛(美国)生物技术工程公司合成，所有引物均经HPLC方法纯化。

HBV引物为：5’-GCTTTGGGCATGGACATTGACCCGTATAA-3’；5’-CTGACTACTAATTCCCTGGATGCTGGGTCT-3’。CMV引物为：5’-CCACCCGTGGTGCCAGCTCC-3’；5’-CCCGCTCCTCCTGAGCACCC-3’。EBV引物为：5’-GTCATCATCCGGGTCTC-3’；5’-TTCG GGTTGGAACCTCCTTG-3’。HCV选择两对引物为：外引物；5’-GGCGACACT-CCACCATAGATC-3’，5’-GGTGCACGGTCTACGAGACCT-3’；内引物：5’-CTGTGAGGAACTACGTCTTC-3’，5’-CCCTATCAGGCAGTACCACAA-3’。HBV-DNA、EBV-DNA和CMV-DNA均采用一步扩增方法，而HCV-RNA检测利用反转录及双扩增PCR方法。所扩增产物分别于浓度为2%琼脂糖凝胶进行电泳，EB染色，紫外灯下观察结果。

二、结果

1.小儿肾病患者肾组织中病毒基因表达的检测结果：224例患儿肾组织中HBV-DNA、HCV-RNA、EBV-DNA和CMV-DNA的阳性率分别为19.6(44/224)、3.1%(7/224)、0.5%(1/224)和0.5%(1/224)；其血清病毒基因表达阳性率分别为21.4%(48/224)、4.0%(9/224)、1.8%(4/224)和0.9%(2/224)。

2.HBV和HCV重叠感染：肾组织中HCV-RNA阳性7例，阳性率为3.1%，在7例HCV-RNA阳性患者中有4例同时检出HBV-DNA阳性表达，即表现为HBV和HCV的重叠感染，且病理分型均为膜性肾病。这一结果提示HCV在肾组织中检出率较低，且多合并有HBV的重叠感染，其与小儿肾脏病的关系尚难以明确。

3.肾组织中HBV-DNA阳性患儿病理类型分析：本组病例中，肾组织HBV-DNA阳性患者共计44例，按WHO分型标准，其中膜性肾病39例(88.6%)，IgA肾病4例(9.1%)，系膜增生性肾炎1例(2.3%)，由此可见HBV感染主要病理改变为膜性肾病。

三、讨论

病毒感染可能是小儿肾脏病常见致病因素之一，以前曾有许多学者先后报道HBV、HCV、EBV和CMV感染与肾脏损害有关，但除对HBV感染与肾脏损害关系得出肯定结论外，其它三种病毒感染与肾脏疾病是否有关尚无明确结论^［1］。我们采用敏感的PCR方法检测了小儿肾病患者血清及肾组织中HBV、HCV、EBV和CMV感染的存在状态及致病意义，结果表明本组研究病例无论血清还是肾组织中HBV检出率比较高，肯定了HBV感染与小儿肾病的关系，这与国内外报道相一致^［2］。其次是HCV感染在某些小儿肾病患者肾组织中检出有HCV-RNA存在，但由于其阳性率较低，尚难说明问题，需继续积累更多资料。关于EBV和CMV感染情况在我们所选择的224例患者中，血清或肾组织中的病毒基因阳性率均非常低，显示这两种病毒在小儿肾脏病的病因学方面并不占有重要的地位。

参考文献

1Lai KN,Ho RT,Tam JS,et al.Detection of hepatitis B virus DNA and RnA in kidneys of HBV-related glomerulonephritis.Kidney Int,1996,50:1965-1970.

2Johnson RT,Couser WG.Hepatitis B infection and renal disease:Clinical,immunopathogenetic and therapeutic considerations.Kidney Int 1990,37:663-669.

(收稿：1998-03-20修回：1998-11-15)