材料和方法
1.检测对象:狼疮肾炎组10例,男2例,女8例,年龄26~48岁,平均年龄30岁,均符合1982年美国风湿学会红斑狼疮的诊断标准和并有肾损害。5例行肾活检,其中弥漫性增生性肾小球肾炎2例,局灶性节段性增生性肾炎2例,膜性肾病1例。1例血Cr为580 μmol/L,其余9例血Cr均正常,24小时尿蛋白量为0.66~7.8 g。其它肾病组10例,男8例,女2例,年龄28~60岁,平均48岁,其中慢性肾炎6例,糖尿病肾病2例,高血压肾小球动脉硬化2例。对照组14例,均为健康成人,男5例,女9例,年龄18~36岁,平均28岁。
2.测定方法:改良的Henson法测定PAF活性。(1)血浆磷脂提取:静脉血放入预冷的含0.45 ml0.4 mmol/L枸橼酸的试管中,4℃离心分离血浆。血浆与氯仿+甲醇+水混合振荡,离心。上清液移入含氯仿+水的试管中,混合振荡,移出下层脂相,36℃水浴中氮气吹干,再溶于少量氯仿中,-20℃保存。(2)血小板制备:Henson改良法制备富含血小板血浆,然后加入5羟色胺5-HT10μg/ml,37℃孵育15分钟,用无钙台氏液洗涤5次,配成浓度为2.5×109/ml血小板液,4℃贮存。(3)刺激血小板分泌5-HT:上述提取的血浆磷脂样本与制备的血小板于37℃孵育10分钟,迅速冷却后4℃离心。(4)5-HT荧光测定:取上述离心分离的上清液0.5ml,与0.5%半胱氨酸液0.1 ml和0.004%邻苯二甲醛液3 ml混匀,沸水浴15分钟,冷却后在荧光分光光度计(F4000,Ex:360 nm,Em:470 nm)上测定5-HT荧光强度。(5)PAF活性单位换算:从5-HT标准曲线查出样本5-HT量,以37℃条件下10分钟内刺激2.5×109/ml血小板释放10 mg5-HT为一个PAF活性单位(AU)。(6)24小时尿蛋白定量采用二氯醋酸法测定。
3.统计学处理:结果以均数±标准差表示,行t检验及相关分析。
结果
1.狼疮肾炎组血浆PAF水平为(11.81±1.80) AU/ml,与对照组(7.29±1.15)AU/ml及其它肾病组(10.08±1.16)AU/ml相比有显著性差异(P均<0.05),其它肾病组与对照组比较也有显著性差异(P<0.05)。
2.狼疮肾炎患者血浆PAF活性与24小时尿蛋白量的相关分析显示,两者呈正相关(r=0.69,P<0.01)。
讨论
我们检测的结果显示,两组肾脏病患者血浆PAF水平均增高,特别是狼疮肾炎组,且狼疮肾炎组PAF水平与尿蛋白定量呈正相关。血浆中PAF含量直接影响肾小球基底膜的通透性,这揭示PAF可能参与狼疮肾炎的肾脏免疫损伤。狼疮肾炎患者免疫功能紊乱是否较其它肾脏病更易导致PAF释放增加及加重肾脏损伤,有待于进一步研究。
(收稿:1998-06-16)
