白细胞介素-6(IL-6)与小儿肾病综合征的关系文献报道不多，且结论不一。我们在检测了原发性肾病综合征(PNS)IL-6血清水平的基础上，进一步用原位杂交技术检测其外周血单个核细胞IL-6mRNA表达，以期从蛋白、基因水平两个层次探讨IL-6在小儿PNS发病中的作用和意义。

一、材料和方法

1.病例选择：PNS组11例，其中单纯型9例，肾炎型2例，男9例，女2例，年龄2岁7月至12岁。所有病例均处于活动期，排除继发性肾病，均为未用过激素及其他免疫抑制剂，无感染及肝功能异常。对照组15例，为健康儿童，其中男9例，女6例，年龄3岁至12岁。

2.方法：(1)血清IL-6水平检测：抽静脉血2ml置干燥管，离心后得血清，用ELISA双抗体夹心法检测。IL-6 ELISA药盒购自法国国际免疫试剂公司。(2)IL-6 mNRA检测：取静脉血2ml，分离出单个核细胞(PBMC)，配成1×10⁶细胞悬液。取5ml细胞悬液涂于载玻片上，晾干，4%多聚甲醛固定10分钟，乙醇逐级脱水，蛋白酶K(10～30μl/ml)37℃10分钟，37℃预杂交2小时，42℃杂交12～16小时，2×SSC 15分钟，0.5×SSC 15分钟，Buffer Ⅰ15分钟，1∶1000抗DIG抗体1～2小时，BufferⅠ15分钟，BufferⅢ5分钟，显色反应2～5小时，苏木精5秒，伊红10秒，二甲苯透明、中性树胶封片。杂交液含3′端DIG标记的IL-6寡核苷酸探针，其序列为3′-CATTTG CCG AAG AGC CA-5′。同时设不含探针空白对照。(3)24小时尿蛋白定量用双缩脲法。(4)用oxstat软件进行t检验。

二、结果(1)PNS组血清IL-6水平为20.14±13.12ng/L，显著高于对照组(5.38±2.49ng/L，P＜0.05)。(2)PNS组血清IL-6水平与其24小时尿蛋白定量成正相关(r=0.705，P＜0.05)。(3)PNS组外周血PBMC IL-6 mRNA表达量为(2.96±0.99)，明显高于对照组(0.031±0.019，P＜0.05)。［以杂交阳性信号比值(阳性信号总面积/细胞总面积)×100，半定量地表示mRNA表达量］。(4)PNS患儿PBMC IL-6mRNA表达与其血清IL-6水平呈正相关(r=0.918，P＜0.01)。

三、讨论IL-6是参与免疫调节和炎症反应的重要细胞因子，与临床上许多疾病特别是免疫相关疾病的发生、发展密切相关。目前小儿原发性肾病综合征中IL-6表达的情况各家结论颇不一致。有学者发现单纯性肾病患儿血清和外周血PBMC培养上清液IL-6活性明显下降［上海免疫学杂志，1990，10：349］，而Garin等观察发现微小病变型肾病患儿血清IL-6水平明显升高［Pediatr Res,1991,29:343A］。我们采用敏感、稳定的ELISA方法检测，发现活动期PNS患儿血清IL-6水平显著高于对照组，提示IL-6血清水平变化在PNS发病中可能起一定作用。我们进一步检测了PNS患儿PBMC IL-6 mRNA表达，发现其IL-6mRNA表达显著高于正常对照组，且与IL-6血清水平成正相关，提示PNS患儿存在IL-6基因转录水平表达异常，其原因有待进一步探讨。血清IL-6水平升高可能与其PBMC IL-6基因转录增强有关。IL-6在PNS中的病理学意义尚未清楚。Garin等证实，IL-6可提高鼠肾小球基底膜³⁵S掺入量，认为IL-6可增加肾小球基底膜对血浆蛋白的通透性［Pediatr Res,1991，29：343A］。我们亦发现PNS患儿血清IL-6含量与其24小时尿蛋白定量成正相关，提示IL-6可能直接或间接参与了PNS肾脏尿蛋白的形成，但有关直接证据及具体机制尚需进一步研究。

(收稿1997-09-25修回1998-01-20)