摘要目的：测定急性肾小球肾炎患儿血和尿中一氧化氮和环鸟苷酸，以期了解一氧化氮在急性肾炎发病过程中的变化。方法：分别采用分光光度和放射性免疫分析的方法测定了17例急性肾小球肾炎急性期患儿血和尿中的NO^－₂／NO^－₃和cGMP，并对6例患儿进行了急性期和恢复期的动态观察。结果：17例急性期患儿血中NO明显升高（69.2±15.7μmol／L vs 31.3±4.6μmol／L，P＜0.05），尿中cGMP降低（366.1±39.0pmol／mg vs 637.6±78.6 pmol／mg，P＜0.05），但尿中NO^－₂／NO^－₃和血cGMP与正常对照组差异不显著。动态观察的6例患儿急性期尿NO和cGMP明显低于恢复期（590.8±141.4 nmol／mg vs 1605.6±149.2nmol／mg，P＜0.05）；（283.4±61.7pmol／mg vs 1083.3±336.9 pmol／mg，P＜0.05）。同时急性期血中NO明显高于恢复期（105.9±27.3μmol／L vs 46.5±10.1μmol／L，P＜0.05）。结论：急性肾炎患儿在急性期尿中NO和cGMP明显低于恢复期，血中NO高于恢复期，而血中cGMP测定与正常对照组差异不显著，NO可能参与急性肾炎的发病及病理生理过程。

THE CHANGES OF URINARY AND PLASMA NO aND cGMP IN CHILDREN WITH ACUTE GLOMERULONEPHRITIS

Zhang Jinjing，Yang jiyun，Ding Jie，Yu Lixia

department of Pediatrics，First Affiliated Hospital，Beijing medical University，Beijing，100034

OBJECTIVE to investigate the changes of urinary and plasma NO and cGMP in children with acute glomerulonephritis（AGN）and its significance in the pathogenesis of AGN．

METHODOLOGY seventeen children with AGN and eighteen healthy children were involved in this study．Urinary and plasma NO^₂／NO^₃ were determined with biochemical assays．The levels of urinary and plasma cGMP were determined with radioimmunoassay．In six of the seventeen AGN patients，dynamic changes of urinary and plasma NO and cGMP were investigated．

RESULTS As compared to the controls，the mean plasma NO^₂／NO^₃ was found significantly increased （69.2±15.7μmol／L vs31.3±4.6 μmol／L，P＜0.05）and urinary cGMP decreased （366.1±39.0 pmol／L vs 637.6±78.6 pmol／L，P＜0.05）in the 17 AGN children．No significant difference in urinary nO^₂／NO^₃ and plasma cGMP was found between the AGN patients and the control．In the follow-up study of the six AGN patients，urinary NO^₂／NO^₃ and cGMP were found significantly decreased at the acute phase as compared to those at the recovery phase（590.8±141.4 vs 1605.6±149.2 nmol／mg；283.4±61.7 vs 1083.3±336.9 pmol／mg，P＜0.05），while plasma NO^₂／NO^₃ was significantly increased at the acute phase as compared to those at the recovery phase（105.9±27.3 vs46.5±10.1 μmol／L，P＜0.05）．

CONCLUSION remarkable changes of urinary NO^₂／NO^₃ and cGMP occur in AGN children．NO might play an important role in the pathogenesis of AGN．

Key words nitric oxide cGMP Acute glomerulonephritis

一氧化氮（nitricoxide，NO）作为一个重要的细胞内信使，具有许多生理及病理生理作用。升高或降低NO的药物现已可能用于临床，故受到基础及临床的广泛重视。已有一些急性肾炎时血或尿中NO变化的报告^［1～3］，但结果不太一致。急性肾小球肾炎是儿科常见疾病，但目前尚无特异治疗。少数患儿还可出现急性肾功能衰竭等并发症，后果严重。鉴于NO是通过影响cGMP合成而发挥生理功能^［4］，我们检测了急性肾小球肾炎患儿急性期和恢复期血及尿中NO代谢产物亚硝酸盐和硝酸盐以及cGMP，以期进一步较全面了解NO在急性肾小球肾炎中的变化。

1对象和方法

1．1研究对象急性肾小球肾炎患儿17例,男8例,女9例,年龄4.5～12岁,对其中6例了动态观察,分别于其活动期(发病1周内)、恢复期(发病1～2月以后,血压正常,肾功能恢复正常)接受血、尿标本的检测。

1．2血及尿标本收集所有病例均于入院的第二天晨7：00～8：00，留取新鲜尿液和血液(EDTA抗凝)，迅速放入冰壶内。1h之内在低温离心机内离心10min后留取上清。

1．3血浆NO^－₃测定利用硝酸盐还原至亚硝酸盐过程中所消耗NADPH量与硝酸盐程度呈正比的原理。先在样品中加入NADPH和FAD，37℃放置5min，并在BT-224自动生化分析仪，波长340nm处测定一次吸光度，再加入硝酸盐还原酶，37℃静置10min，第二次读取吸光度，通过吸光度下降值计算硝酸盐的浓度。(方法由解放军总医院提供)。

1．4尿NO^－₂／NO^－₃测定采用改良的Griess方法。(由深圳晶美生物公司提供的进口试剂盒)先用去离子水将尿液进行10倍稀释，分别加入硝酸盐还原酶和缓冲液，置37℃水浴孵育1 h后，再分别加入对氨基苯磺酰胺和α-萘基-乙二胺各0.5ml，室温静置10min。应用755分光光度计在550nm处测定样品的吸光度。为校正尿量及尿稀释程度的影响，用同份标本测定肌酐（mg），结果以NO／Cr表示。

1．5血及尿cGMP测定由上海中医药大学提供试剂盒

1．5．1血浆处理取0.1ml血浆加入2.00ml无水酒精，振摇1 min，静置5min，3000r／min离心10min。将上清移入指形管，残渣再加入75%酒精1ml摇匀，3000r／min离心10min。合并上清，于60℃水浴中吹干，待干后残渣放于4℃保存。测量时用1.0ml醋酸缓冲液溶解，然后取0.1ml测量，此时稀释倍数为100。

1．5．2尿液测定时直接将0.1ml尿液置于7ml醋酸缓冲液中，混匀，取0.1ml进行测量。此时稀释倍数为700。

1．5．3操作流程采用竞争抑制法。先加入¹²⁵I-cGMP和抗cGMP血清各100μl，摇匀，4℃存放，过夜，次日再加正常兔血清和羊抗兔IgG各100μl，摇匀，4℃存放过夜，3500r／min离心20min，负压吸去上清液，用测量沉淀γ-放射性强度。

1．6统计学处理结果用均数±标准误表示。采用SSPC／PC软件进行t检验和配对t检验。

2结果

2．1尿NO／Cr急性肾炎患儿活动期的尿NO／Cr低于正常对照组（1126.1±166.1nmol／mg vs 1306.2±210.1nmol／mg），但无统计学意义。鉴于尿NO／Cr测定值个体差异比较大，为此在同一个体进行动态观察，发现动态观察的6例患儿均表现出活动期减低，恢复期升至正常范围（590.8±141.4nmol／mg vs 1605.6±149.2 nmol／mg，P＜0.05）的动态变化。

2．2尿cGMP／Cr急性肾炎患儿的尿cGMP／Cr低于正常对照组（366.1±39.0pmol／mg vs 1083.3±336.9pmol／mg，P＜0.05），动态观察的6例患儿呈活动期降低，恢复期升至正常范围（283.4±61.7pmol／mg vs 637.6±78.6pmol／mg，P＜0.05）的动态变化。

2．3血浆NO17例急性肾炎患儿活动期的血浆NO高于正常对照组（69.2±15.7μmol／L vs 31.3±4.6μmol／L，P＜0.05），动态观察的6例患儿也呈现由高至低的变化，即活动期高，恢复期恢复正常。（105.9±27.3μmol／L vs 46.5±10.1μmol／L，P＜0.05）

2．4血浆cGMP急性患儿血浆cGMP与正常对照组相比无统计学区别。

3讨论

NO在体内作为一种重要的信息分子和效应分子有着多种作用，如扩张血管、神经传导、以及参与炎症和细胞保护过程。NO可能参与多种疾病发生发展的过程，如高血压，糖尿病肾病，尿路梗阻，肾小球肾炎和药物肾毒性^［5］。NO与细胞内可溶性鸟苷酸环化酶（GT）的亚铁原卟啉上的铁离子结合形成NO-Heme-G1复合物，经历三维结构的变化，以促进由GTP生成cGMP，后者刺激依赖cGMP的蛋白激酶，调节磷酸二酯酶和离子通道，而呈现各种不同的生理功能^［6］。另一方面NO本身半衰期极短，在体内迅速氧化生成稳定的无机的NO^－₂／NO^－₃，所以NO^－₂／NO^－₃及cGMP的测定反映了NO的状况及其活性。我们同时测定血与尿中的NO^－₂／NO^－₃，与cGMP，以全面了解NO的变化，及其在体内的活性。

不少作者曾利用动物模型观察了肾炎时NO的变化，证实在免疫介导的大鼠肾炎模型中有NO的参<