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材料和方法：无菌操作下，取14～16天大鼠胚胎，在显微解剖镜下，于中脑腹侧部分离出黑质核团，剪碎，加入0.125％胰酶(trypsin，1∶250,Sigma)溶液,充分吹打分离细胞、离心、终止胰酶作用。不锈钢网滤过得到均匀的细胞悬液1 ml(1×106个细胞/ml)，加入已涂有多聚赖氨酸的培养板中培养。静置5小时,将培养皿分为NGF（神经生长因子)、BDNF(脑源性神经生长因子)、PDGF(血小板源性神经生长因子)、bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)、IL-6(白细胞介素-6)5个实验组和对照组，加入不同成分的NTFs 1 ml(50 ng/ml )。对照组加常规培养液，每孔总容量为2 ml。各组每次用6个孔，相同条件下重复5次实验培养。
SP法对培养细胞行TH(酪氨酸羟化酶)单克隆抗体(Sigma 1∶1500)免疫组化染色。对照染色用羊血清代替第一抗体。计算机图像分析仪上用灰度分离法测定TH(酪氨酸羟化酶)阳性神经元数量。
结果：培养物进行TH免疫组化染色后，TH阳性细胞呈棕褐色，带有神经突起。经细胞计数所得结果显示TH阳性细胞为85%～90％，证明本实验培养的细胞绝大部分是DA能神经元。比较NTFs对胚胎中脑黑质神经元作用可见BDNF、PDGF及bFGF能促进中脑DA神经元发育，提高神经元及长突起神经元存活率。BDNF在整个培养期(3～21天)都有较强营养作用，PDGF在早期(3～7天)、 bFGF在中期(7～14天)有轻度作用，NGF和IL-6则无此作用。
讨论：随着新的NTFs不断被发现，单独一些因子等对DA能神经元的营养作用也陆续有相应的研究报道，但各家报道的实验结果并不一致，有些甚至相反。实验中所观察的5种神经营养因子,均是有代表性的靶源、非靶源性NTFs,促有丝分裂剂或淋巴因子。在体外DA培养中，明确它们对DA能神经元生长发育作用的影响差别，将为临床上筛选NTFs治疗PD提供实验依据。
本课题受辽宁省自然科学基金(NO.619013)资助
(收稿：1998-11-28修回：1999-05-24)
