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资料和方法：根据AD的临床诊断标准，本文入选AD组51例，男17例，女34例，平均年龄（74.8±7.6）岁。从同期住院患者中选出神经疾病Ⅰ组30例，其中脑血管病20例，脑膜炎10例；男16例，女14例；平均年龄（68.3±9.9）岁；神经疾病Ⅱ组36例，其中颈、腰椎病28例，运动神经元疾病8例）；男20例，女16例；平均年龄（64.5±10.6）岁；所有神经疾病组患者细微精神状态检查（MMSE）评分均≥28分，做为对照组。
每例患者常规行腰穿术，留取2 ml脑脊液测定apoE含量，同时取晨血5 ml提取DNA，采用PCR进行DNA扩增，用HhaI酶切电泳，在溴乙锭染色紫外灯下确定apoE等位基因。脑脊液apoE含量测定采用ELISA方法。第一抗体用多克隆羊抗人apoE抗体，第二抗体用辣根过氧化酶标记的抗体。操作步骤是微孔加稀释的第一抗体置4℃过夜。酶标板用0.05% Tween 20冲洗3次，加稀释脑脊液标本和apoE标准品（由比利时Gent大学，Rosseneu教授提供），置4℃孵育过夜（12～16小时），用0.05 % Tween 20冲洗5次，再加稀释第二抗体和正常羊血清，置37℃孵育2小时，冲洗5次，加四甲基苯（TMB）置37℃，20分钟。最后用2.5 mol/L硫酸终止反应。用405 nm波长比色测定吸光度，在标准曲线对数坐标上查出apoE浓度值，计算出apoE浓度。
结果：AD组脑脊液apoE浓度为(2.01±0.72) mg/L，明显高于神经疾病Ⅰ组［（1.48±0.56)mg/L］和Ⅱ组［（1.21±0.34) mg/L］，P＜0.01。AD组、神经疾病Ⅰ和Ⅱ组apoE等位基因频率比较，结果显示,AD组ε 4基因频率是0.31，显著高于神经疾病Ⅰ组（0.15）和Ⅱ组（0.11）。
讨论：apoE是脑脊液内蛋白的主要成分，它很难通过血脑屏障。脑内apoE主要来源于星形细胞、小胶质细胞和神经元，它直接反映脑内apoE的产物。本文AD组脑脊液apoE水平明显高于神经疾病Ⅰ和Ⅱ组，表明apoE大量存在于AD脑内，同Yamada等报道结果相同。AD脑内apoE含量升高，可能与老年斑、神经纤维缠结形成和脑血管淀粉样变性增多有关，因为大量研究已经证实AD脑内apoE可能参与老年斑和神经纤维缠结的形成。另外，AD组apoEε4基因频率显著高于神经疾病Ⅰ和Ⅱ组，提示apoEε4与AD发病关系密切。
由于本组资料因采集正常非痴呆、患非神经系统疾病患者脑脊液做为对照组较困难，所以将来建立脑脊液apoE正常对照参考值，研究AD脑脊液apoE的变化规律，可能会解释AD的发生和发展过程，对AD的将来研究提供客观的依据。
(收稿：1999-06-13修回：1999-08-09)
