关键词： 脂蛋白类；LDL；一氧化氮；脑缺血

【摘要】目的研究急性缺血性脑卒中患者血浆氧化低密度脂蛋白（oxLDL）与一氧化氮（NO）的关系及它们在缺血性脑卒中发病机制中的作用。方法测定45名健康体检者、20例动脉硬化患者和75例急性缺血性脑卒中患者血浆LDL及体外氧化获得的oxLDL对血小板聚集功能和NO水平的影响。结果动脉硬化和脑卒中患者血浆oxLDL值均明显升高，提示血浆LDL及oxLDL对血小板聚集有明显的促进作用，同时降低NO水平；血小板聚集的增强和oxLDL呈正相关，和NO呈负相关，而和LDL水平无相关性。结论脑卒中和动脉硬化患者LDL对氧化修饰的易感性增加，氧化修饰的LDL通过激活血小板、灭活NO而促进动脉粥样硬化，易致血栓形成。因此，抗氧化治疗在脑卒中和动脉硬化的防治中有重要意义。

Interaction of plasma oxidized low density lipoprotein with nitric oxide in pathogenesis of ischemic strokeXU Yibai, WANG Xianjun, ZHU Jinshui,et al. Huzhou Second Municipal Hospital, Huzhou 313000

【Abstract】Objective To investigate the interaction of plasm oxidized low density lipoproptein (oxLDL) with nitric oxide(NO) in pathogenesis of ischemic stroke.MethodThe effect of plasma LDL and oxidize modified LDL in vitro in 45 healthy controls, 20 patients with atherosclerosis and 75 patients with acute ischemic stroke on platelet aggregation and NO level was determined.Results The plasma LDL and oxLDL of patients significantly enhanced platelet aggregation and decreased the level of NO simultaneously.The increase in platelet aggregation was related to the concentrations of plasma oxLDL positively and to the levels of NO negatively. But no relation between platelet aggregation and plasma LDL.ConclusionThe LDL of patients with atherosclerosis and ischemic stroke is more susceptible to oxidative modification and the oxidized LDL can activate platelet and inactivate NO.These activities may promote atherosclerotic thrombosis and development of ischemic stroke.

【Key words】Lipoproteins, LDL Nitric oxideCerebral ischemia

动脉粥样硬化是脑梗死的主要病理基础，近年的研究结果发现，氧化低密度脂蛋白(oxLDL)及一氧化氮(NO)在动脉粥样硬化形成中起关键作用^［1，2］。有关缺血性脑卒中患者血浆oxLDL及NO水平的变化已有报道，但两者间相互作用及其在脑梗死发病过程中的病理机制尚少报道。我们通过观察急性缺血性脑卒中患者血浆oxLDL对血小板聚集及NO的影响，进一步探讨oxLDL和NO在脑血栓形成中的共同致病机制。

资料和方法

一、资料

急性缺血性脑卒中患者75例，男49例，女26例，平均年龄（62±13）岁(43～84岁)。病程3天内42例，4～7天33例，平均（4±2）天。符合全国第二届脑血管病学术会议修订的诊断标准。有1次以上CT和MRI检查，排除脑出血、心肌梗死。发病前1个月内未用过阿司匹林等抗血小板药和维生素E等抗氧化剂。肝、肾功能正常。单纯动脉硬化组20例，男15例，女5例，平均年龄（66±9）岁(53～84岁)。颈动脉彩色超声检查有1个以上斑块。均无脑卒中和心肌梗死病史。对照组为45名健康体检者，无心脑血管疾病、高血压及糖尿病病史。颈动脉彩色超声检查未见斑块。平均年龄（60±5）岁(49～69岁)。脑卒中组合并高血压50例(67%)，糖尿病10例(13%)，高脂血症38例(51%)；动脉硬化组分别为12例(60%)，3例(15%)和9例(45%)，二组比较差异无显著意义(P＞0.05)。

二、方法

1.oxLDL的测定：全部患者于入院次日早8时空腹卧位抽取静脉血，分离血浆，ELISA法测定oxLDL。试剂盒购自上海荣盛生物技术有限公司，按说明书操作。

2.LDL的分离：采用密度梯度超速离心法，分别分离健康对照组、动脉硬化组和脑卒中组患者的LDL，测含量后低温贮存备用。LDL以胆固醇(LDL-C)计量，与血小板孵育时的终浓度为1 g/L。

3.oxLDL的制备：参照Coffey等^［3］方法，即将分离得到的LDL在含5 μmol/L CuSO₄的等渗盐水(pH 7～8)中透析（透析液体积超过LDL的100倍），当LDL由金黄色转变为灰黄色直至无色透明时，再移至含0.5 mmol/L EDTA(pH 8～9)的等渗盐水中透析，如此重复4次，即得氧化型LDL。测含量后低温贮存备用，与血小板孵育时的终浓度亦为1 g/L。

4.血小板聚集功能的测定：空腹取正常人静脉血，3.28%枸橼酸钠抗凝，500 r/min离心10分钟，上层富含血小板的血浆再以600 r/min离心10分钟，获压积血小板，生理盐水洗涤2次，配成血小板悬液，血小板浓度为2×10¹¹/L，以5 mol/L的二磷酸腺苷为诱导剂，在TYXN-91智能血液凝集仪上测定血小板聚集功能，然后，仍用正常人血小板悬液分别与健康对照组、动脉硬化组及脑卒中组患者的LDL于37℃孵育20分钟，再测血小板聚集功能，而后将动脉硬化组和脑卒中组患者经体外氧化后获得的oxLDL分别与上述同一正常人血小板悬液于37℃孵育20分钟后，再测血小板聚集功能。

5.NO的测定：用0.15 mol/L硫酸锌去蛋白后，以α萘乙烯二胺分光光度法测定NO₂^-浓度来间接反映NO的含量^［4］，分别测定正常血小板悬液与健康对照组、动脉硬化组及脑卒中组患者的LDL和oxLDL孵育前后的NO浓度。

6.统计学处理：数据用均数±标准差(±s)表示，组间比较用t检验及直线相关分析。

结果

1.血浆oxLDL水平：健康对照组为（412±144） μg/L，动脉硬化组和脑卒中组分别为（689±83） μg/L和（942±133） μg/L，均明显高于对照组(P＜0.01)。

2.LDL、oxLDL对血小板聚集的作用：正常血小板加健康对照组LDL前的最大聚集率为（56±17）%，加健康对照组LDL后为（59±17）%，差异无显著意义(P＞0.05)。正常血小板加动脉硬化组患者LDL前后的最大聚集率分别为（50±8）%和（58±8）%，差异有显著意义(P＜0.01)。正常血小板加脑卒中组患者LDL前后的最大聚集率分别为（49±14）%和（61±13）%，差异有显著意义(P＜0.01)。脑卒中组LDL对血小板聚集的增强虽大于动脉硬化组，但差异无显著意义(P＞0.05)。动脉硬化组患者LDL经体外氧化前后的血小板最大聚集率分别为（58±8）%和（74±10）%，差异有显著意义(P＜0.01)。脑卒中组26例患者LDL氧化前后的血小板最大聚集率分别为（58±14）%和（71±13）%，加氧化修饰LDL的血小板聚集率比氧化前明显增高(P＜0.01)。

3.LDL、oxLDL对NO的作用：正常血小板悬液加健康对照组LDL前的NO水平为（0.30±0.02） μmol/L，加对照组LDL后为（0.30±0.02） μmol/L，差异无显著意义(P＞0.05)。正常血小板悬液加动脉硬化组患者LDL前后的NO水平为（0.38±0.04） μmol/L和（0.30±0.04） μmol/L，差异有显著意义(P＜0.01)。加脑卒中组患者LDL前后的NO水平为（0.32±0.03） μmol/L和（0.22±0.05） μmol/L，差异有显著意义(P＜0.01)。脑卒中组LDL降低NO的作用大于动脉硬化组，但差异无显著意义(P＞0.05)。正常血小板悬液加动脉硬化组患者体外氧化前后LDL的NO水平为（0.30±0.04） μmol/L和（0.18±0.05） μmol/L，差异有显著意义(P＜0.01)。加脑卒中患者氧化前后LDL的NO水平为（0.21±0.03） μmol/L和（0.12±0.04） μmol/L，氧化修饰后的LDL比氧化前血小板悬液的NO水平明显降低(P＜0.01)。

4.血小板聚集改变和oxLDL及NO含量的关系：脑卒中患者LDL对血小板聚集的增强和血浆oxLDL值呈正相关(r=0.624,P＜0.01)，和血小板悬液NO含量降低呈负相关(r=-0.556,P＜0.01)，而和血浆LDL值无相关性(r=0.223, P＞0.05)。动脉硬化组患者LDL增强血小板聚集也和血浆oxLDL值呈正相关(r=0.491,P＜0.05)，和血小板悬液NO降低呈负相关(r=-0.501,P＜0.05)。

讨论

LDL可引起血小板功能亢进，聚集性增高，在动脉粥样硬化和缺血性脑卒中发病中有重要的病理学意义，但LDL激活血小板的机制尚不清楚^［5］。Imaizumi等^［6］和Heery等^［7］发现，缺血性脑卒中患者血浆LDL含有较高水平的血小板激活因子样脂质(PAF-LL)，具有激活血小板、白细胞，增加粘附聚集的作用，可参与脑卒中的发病。本组结果显示，动脉硬化和缺血性脑卒中患者LDL对血小板聚集均有明显增强的作用，这种血小板聚集的增强和血浆oxLDL水平呈明显正相关，而和血浆LDL水平无相关性。本组结果还显示，患者LDL经体外氧化后，对血小板聚集的促进作用比氧化前更为明显，这表明，LDL对血小板的激活主要是oxLDL的作用。本组中动脉硬化和缺血性脑卒中患者血浆oxLDL水平明显高于正常对照组，但和血浆LDL水平间无相关性，提示LDL的氧化修饰不完全取决于LDL的含量，Chait等^［8］研究发现，LDL的不同亚组对氧化修饰的易感性不同，B型LDL颗粒小，密度高，易被氧化修饰，不同个体LDL的基因表达不相同，造成临床<