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中图号Q789
共转导多巴胺合成所必需酶与辅酶基因，使被转导细胞成为自主多巴胺细胞。
1材料和方法pTH、pGCH、pAADC分别为含酪氨酸羟化酶(TH)、三磷酸鸟苷环水解酶I(GCH)、芳香族氨基酸脱羧酶(AADC)基因的腺伴随病毒(AAV)载体质粒。以磷酸钙共沉积法转染载体质粒、辅助质粒与腺病毒质粒于293包装细胞，所获AAV载体颗粒滴度约1011～1012/mL。共转导293细胞分：(1) AAV-TH单转导组；(2) AAV-TH/AAV-GCH共转导组；(3) AAV-TH/AAV-GCH/AAV-AADC共转导组。以高效液相色谱法测定各组共转导细胞中左旋多巴与多巴胺含量。
2结果(1) AAV-TH单转导组左旋多巴及多巴胺含量均不能测到；(2) aAV-TH/AAV-GCH共转导组左旋多巴的细胞平均生成量为7.8 ng，多巴胺仍不能测到；(3) aAV-TH/AAV-GCH/AAV-AADC共转导组左旋多巴的细胞平均生成量为1.8 ng，多巴胺的细胞平均生成量为0.3 ng。
3讨论在正常中脑黑质细胞，多巴胺生成首先由TH将左旋酪氨酸羟化为左旋多巴，反应过程需有TH的辅酶四氢蝶呤(BH4)参与。GCH是将GTP转变形成BH4的关键限速酶。经TH催化形成的左旋多巴，在AADC进一步作用下脱羧化为多巴胺。帕金森病时TH、GCH、AADC活性均发现明显不足。本研究结果显示，共转导上述三种生物酶基因，可使被转导细胞自主地将培养液中的左旋酪氨酸有效转化为多巴胺。Bencsics等报告TH和GCH基因的共转导可增加左旋多巴的生成，Kang与我们曾报道，在预先给予BH4条件下发现TH和AADC基因的共转导可增加多巴胺的生成。本研究结果则表明TH、GCH、AADC3种基因的共转导，可使被转导的靶细胞成为完全的自主多巴胺细胞，这一方法的建立，对帕金森病基因治疗可能具有十分重要的意义。
(1998-06-04 收稿)
