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1材料与方法
23例肿瘤标本均为术中切除的新鲜肿瘤组织。按WHO分类标准分为星形细胞瘤14例(纤维型6例，原浆型4例，间变型4例)，胶质母细胞瘤9例，其中多形性胶质母细胞瘤(GBM)4例。6例正常对照均为脑外科手术中减压切除的脑组织。标本经10%甲醛固定24 h后石蜡包埋，每个标本做切片4张，分别滴加3种蛋白单克隆抗体；阴性对照片此步骤滴加PBS液。然后分别滴加二抗和ABC。最后经0.6 mg/mL DAB和0.3% H2O2染色及显色，苏木素衬染后观片。p16和cyclin D1在滴加一抗前需经微波法抗原修复。
判断指标：细胞核或浆中出现棕黄染色为阳性。高倍镜下于每张切片角及中央取5个视野，各计数100个瘤细胞中阳性细胞所占的比例，分为：阴性(-)：阳性细胞所占比例＜10%；弱阳性(+)：阳性细胞达10%～30%；中等阳性(++)：阳性细胞达31%～60%；强阳性(+++)：阳性细胞＞60%。cyclin D1阳性表明有过度表达，p16和pRB阴性表明有缺失，此二者均属异常情况。
2结果
cyclin D1，p16，pRB阳性染色在胞核和/或胞浆。在胶质瘤中cyclin D1阳性占17/23，p16和pRB阴性分别为13/23和8/23，在不同肿瘤分型中随着恶性程度的增加，3种因子异常也出现增加(经秩和检验，P＜0.01)。23例肿瘤组织中19例，3种因子中有一种以上因子异常，而正常脑组织仅占1/6，两者之间存在显著性差异(P=0.006，确切概率法)；相反，星形细胞瘤(10/14)和胶质母细胞瘤(9/9)之间并无统计学差异(P=0.124,确切概率法)。将3种因子进行配对分析，并无显著性相关(P＞0.05)，即三者之中一种因子异常并不影响其余两种的表达。
3结论
在星形细胞瘤和胶质母细胞瘤中细胞周期调控基因cyclin D1、p16、pRB都存在着异常。其中cyclin D1为过度表达，而p16和pRB则表现为缺失，且都与肿瘤恶性程度有关。由此组成的cyclin D1/p16-pRB调控路径的异常在此类肿瘤中更是高频事件，与肿瘤发生有关。3种因子的异常并不相互影响，其中任何一种因子的异常都将导致整个路径失控，使细胞周期调节失败，引起肿瘤细胞增殖加速或恶变。
1999-07-19收稿
