第四军医大学学报1999年第20卷第2期

程飚陈绍宗李学拥李跃军

摘要目的：观察失神经支配皮肤植入神经与否对环层小体溃变和再生过程的影响，以深入探讨感觉神经植入术的机制.方法：猴手指皮肤造成失神经支配并立即植入神经，观察到期取指腹标本，胆碱酯酶标记银套染，光镜为主观察环层小体溃变和再生过程、程度、小体再生率及再生途径.结果：未植入神经的皮肤环层小体溃变快，不能再生环层小体；植入的神经能延缓环层小体非神经成分溃变过程，并可再生环层小体.结论：植入猴手指失神经支配的皮肤内的神经能再生环层小体，再生途径为溃变小体获得神经再支配，术后12 mo小体再生率为60%，尚未完成再生过程.

关键词：神经移植术环层小体再生

0引言

为进一步探讨神经植入术后感觉功能重建的程度，对猴手指无毛皮肤失神经后环层小体溃变过程，植入神经后它的再生过程及两者间的关系进行了观察，使我们深入认识了感觉神经植入术机制，为临床应用进一步提供了实验依据.

1材料和方法

健康成年恒河猴9只（本校实验动物中心提供），雌雄不拘，体重4 kg～6 kg，通过检疫. 除拇指以外随机选择36个手指用于本实验. 其中4个手指因术后感染剔除，余32指随机分成三组. ①神经植入组：设1，3，5，8，12 mo五个观察组分别为2，3，3，3个手指；②未植神经组：设组同上，分别为3，3，3，2，2个手指；③正常皮肤对照组：5个手指.

动物以氨胺酮麻醉（4 mg/kg～7 mg/kg, im），静脉补液，持续给氧. 放大镜下，在手背近侧切断尺神经手背支和桡神经浅支主干并各切除1.0 cm，两神经之近断端反折缝合固定，造成手指和手背失神经支配. 之后①组各指作两侧中线切口，掀起指掌侧皮辨，游离两条指固有神经并在指腹切断，其中一条神经在指根部切断弃去，近断端作反折固定，另一条在指根部提出创口备用，如此造成手指掌侧皮肤失神经支配. 继之作指掌侧皮瓣皮下面中央纵形浅表面切开，将备用神经顺向全程植入切口，神经末端用8/0尼龙线固定于指腹中央，间断缝合皮下组织切口，原位缝合皮瓣. ②组各指将两条指神经均切除，其余处理同①组. ③组各指不进行手术，保留原指固有神经支配.

各组观察到期，再次麻醉动物，生理盐水和40 g/L多聚甲醛心脏灌注，切取2块指腹皮肤组织，一块用150 g/L中性钙福尔马林液固定，作25 μm冰冻切片，胆碱酯酶标记镀银套染. 光镜观察失神经皮肤中环层小体溃变过程、神经植入失神经皮肤后环层小体的溃变与再生过程、程度、再生途径及再生率、每组3～5张切片. 另一块组织按电镜常规处理，对部分环层小体结构作透射电镜观察.

再生的环层小体判定标准：溃变环层小体内核色加深，直径增大并超过正常，外核板层样结构清晰，被囊完整，染色加深.

环层小体再生率计算法：低倍镜下全部切片中再生的环层小体数/环层小体总数.

2结果

2.1猴指腹正常皮肤中环层小体的光镜观察该种小体圆或卵圆形，位于真皮深层，多位于血管周围. 小体内核（轴突成分）呈黑色或棕黑色，其直径约为整个小体直径的1/10，外核呈淡棕色，洋葱样同心圆结构，最外层的被囊染成黑色，光滑而平整（Fig 1）.

2.2失神经支配皮肤植入神经与否对环层小体再生的影响失神经后，皮肤中的各种神经成分（内核）立即发生溃变，皮肤也逐渐萎缩，表现为结构紊乱，汗腺管上皮细胞分离等（Fig 2）.

环层小体的内核因以神经成分为主，故内核首先溃变，光镜下早期表现为染色变浅（Fig 3）被囊皱缩，逐渐发展为内、外核结构模糊，小体体积变小. 最后结构消失. 未植神经组标本于术后12 mo未发现环层小体再生. 在神经植入组，可见环层小体的非神经成分（外核）溃变过程被延缓. 术后5 mo已有环层小体再生，其再生方式为溃变的小体重新获得神经再支配. 随观察时间的延长，小体再生率逐步增加，但12 mo时小体体积仍小于正常，而内核比例较大，具体过程如下.

2.2.1未植神经组1 mo时，环层小体内核染色变浅，被囊开始皱缩，外核结构变化不明显（Fig 3）. 失神经3 mo后，其内核染色浅、不均匀，部分外核模糊，被囊皱缩明显（Fig 4）. 5 mo，小体的内、外核染色均浅，结构欠清晰，部分被囊溶解. 失神经8 mo时，小体轮廓可辨认，体积明显缩小，被囊溶解破裂. 12 mo组：则仅见溃变小体的残迹，体积很小，内、外核及被囊结构消失（Fig 6）.

2.2.2植入神经组植入神经1 mo时，内、外核情况与未植神经者相似，被囊有皱缩，但着色较深. 3 mo组，其内、外核染色浅，内核直径小，被囊完整，皱缩未加剧（Fig 7）. 5 mo后，在植入神经的皮下小血管附近有环层小体的再生，小体的再生率为50%，而未获得再支配的环层小体体积较小，内、外核虽可辨，但结论不清. 植入神经8 mo，环层小体的再生率增至55%，内核染色深，轮廓清晰，被囊色加深但仍有皱缩；未获得神经再支配的小体体积较再生者小，被囊皱缩但较完整. 内、外核可辨（Fig 8）. 12 mo后小体的再生率为60%，内核直径更大，色愈深，轮廓清，被囊色深且厚，光滑完整，无皱缩. 此时小体体积略小于正常，外核清晰(Fig 9)；未获得再生的小体体积较小，内、外核可辨，但结构不清晰(Fig 10).

3讨论

我们曾证明，神经植入条件下的触觉小体再生快、数量多而且完善^［1］. 本实验又证明环层小体也可获及较好的再生. 触觉小体和环层小体均属快适应纤维感受器，但感受振动频率不同，前者对触觉敏感，提供两点分辨觉和波动觉，最适宜刺激为30 Hz左右. 后者对突然施加的刺激和高频振动敏感，最适宜刺激为250 Hz左右. 这两种最主要的感觉小体能获及神经再支配，说明感觉恢复比较完全，为神经植入术的应用进一步提供了实验依据.

实验发现，皮肤失神经后植入神经与否，对皮肤中原有环层小体的溃变和再生有着重要作用：①植入神经可延缓小体非神经成分溃变过程，减轻溃变程度. 术后3 mo，未植入神经的皮肤中环层小体溃变较明显，并随时间延长加剧，外核模糊，被囊溶解破裂. 8 mo时虽小体轮廓可辨认，但结构不清，体积显著缩小，于12 mo仅剩下溃变痕迹. 而在神经植入组，术后12 mo已经溃变而尚未获及再支配的小体则表现体积缩小，内外核可以被区分，但结构不清晰. ②植入的神经为环层小体再生提供了神经来源. 实验发现，植入神经组皮肤中原有神经纤维溃变快，5 mo结构已消失，而未植神经者需8 mo，术后5 mo植入神经组再生的神经未梢分布已达正常，此环层小体也获及再生. 再生的方式或途径是溃变小体获及神经再支配，表现为内核染色加深，直径增大并显著超出正常，外核板层结构清晰，被囊染色加深、完整、判定再生的理由是：环层小体的内核成分主要为神经组织，银染条件下呈黑色，颜色深浅决定于神经成分多少，同时得到电镜检查证实（Fig 11）.

与触觉小体再生特点比较，环层小体再生较迟，约5 mo. 进展也较慢，8 mo时再生率为55%，12 mo为60%. 这一过程中小体体积逐渐增大，外核结构逐渐清晰，内核逐增大色加深，被囊皱缩消失，厚度明显增加并深染. 此时 小体的轴突仍由多轴突支配，未达到正常单轴突支配. 这与我们观察的神经纤维再生规律相同，即再生纤维未发育成熟之前，数量也总是超过正常水平，以后则逐渐减少^［2］. 本实验12 mo组看到的小体内核直径大，说明轴突数量较多，此时小体的体积也达到正常，未获得再支配的小体非神经结构依然存在而无溶解，暗示随时间延长环层小体再生率有可能增加并进一步发育成熟.

图1正常猴手指皮肤中环层小体

fig 1Normal pacinian corpuscle of monkey finger's skin×100

图2失神经后皮肤溃变（电镜）

fig 2Degeneration of skin after denervated (EM)

图3失神经1 mo溃变的环层小体

Fig 3Degeneration of pacinian corpuscle after denervated lst month×100

图4失神经3 mo溃变的环层小体

Fig 4Degeneration of pacinian corpuscle after denervated 3th month×100

图5失神经8 mo溃变的环层小体

Fig 5Degeneration o