一、材料与方法

1997年3～5月，我们观察了氧化修饰低密度脂蛋白（ox-LDL）对血管内皮细胞表达血管细胞粘附分子-1（VCAM-1）的影响。

血管内皮细胞培养：ECV-304人脐静脉内皮细胞株由武汉大学中国动植物细胞保藏中心提供，接种于含15%新生小牛血清的DMEM（美国GIBCO产品）培养液中，在37℃、5% CO₂培养箱内培养传代。低密度脂蛋白（LDL）的分离与氧化修饰：用超速离心法从健康人外周血中分离LDL，其蛋白含量按Lowry法检测。将LDL提取液分为2份，1份加入EDTA（终浓度为200 mmol/L）保护，为非修饰的LDL；另1份加入终浓度为10 μmol/L的CuSO₄，置37℃保温24 h后超滤除菌，置4℃冰箱保存待用。实验分组：按传代法制备细胞悬液，以2×10⁴/cm²细胞量接种于放有盖玻片的中号培养皿中，待细胞达到亚融合状态时，分为LDL组、ox-LDL组和对照组，前二者分别加入LDL和ox-LDL，终浓度为25 μg脂蛋白/ml培养液；对照组只加等量的PBS，然后继续培养24 h。血管内皮细胞VCAM-1的亲合免疫细胞观察：细胞培养终止时，将培养液倾去，夹出载有细胞的盖玻片，PBS洗涤生长在盖玻片上的细胞2次，冷丙酮固定细胞15 min，PBS洗涤后采用SABC法作免疫组化染色。鼠抗人VCAM-1单克隆抗体购自美国CA公司，SABC试剂盒购自武汉博士德公司。阴性对照用PBS分别取代一抗和二抗，染色阴性。随机选择VCAM-1蛋白反应阳性细胞经MPIAS-500多媒体彩色病理图文分析系统测定积分吸光度〔A，旧称光密度(OD）〕。

二、结果

VCAM-1亲合免疫细胞化学染色可见对照组、LDL组和ox-LDL组皆有VCAM-1阳性细胞，VCAM-1蛋白分布于细胞膜上，呈棕黄色（图1、2）。经图像分析显示，ox-LDL组VCAM-1染色阳性细胞膜的积分吸光度（97.2±13.45）明显增高，与对照组（52.11±2.55）和LDL组（62.21±7.53）比较，差异有显著性(F检验，均为P＜0.01)。

三、讨论

细胞粘附分子是一类由细胞产生，存在于细胞表面，介导细胞与细胞、细胞与细胞外间质相互作用的糖蛋白分子。VCAM-1属于细胞粘附分子的免疫球蛋白超基因家族成员，主要由血管内皮细胞表达。已发现有许多因素如白细胞介素、 肿瘤坏死因子等皆可诱导内皮细胞VCAM-1表达。 本实验观察到ox-LDL能使培养的内皮细胞VCAM-1蛋白表达增强，与对照组和LDL组比较差异明显，提示ox-LDL可能是增强血管内皮细胞表达VCAM-1重要因素之一。

图1正常内皮细胞VCAM-1表达DAB染色×200

图2受ox-LDL刺激的内皮细胞VCAM-1表达DAB染色×200

研究表明，VCAM-1在动脉粥样硬化的发生和发展中具有重要作用^〔1，2〕。在有动脉粥样硬化倾向的部位，最先被观察到的变化是单核细胞聚集，VCAM-1参与了这一过程。VCAM-1主要以两种形式表达，即具有7个和6个免疫球蛋白样结构域的VCAM-7D和VCAM-6D，它们通过与单核细胞表面的整合素受体（VLA-4）结合，介导单核细胞粘附、穿越内皮，定居于内皮下的单核细胞随后激活、分化成巨噬细胞，进而聚集脂质而转变成泡沫细胞，形成动脉粥样硬化的初始损害。此后，随着单核细胞的连续粘附和内皮下移行，不断形成更多的巨噬细胞，并逐渐使血管平滑肌细胞从血管中层向内膜下移行和增殖，促使病损进一步发展。由此认为，ox-LDL引起血管内皮细胞VCAM-1表达增强，导致单核细胞与内皮细胞的粘附、聚集，可能是动脉粥样硬化形成的重要机制之一。

参考文献

1，Vanderwal AC, Das PK, Tigges AJ, et al. Adhesion molecules on the endothelium and mononuclear cells in human atherosclerotic lesions. Am J Pathol,1992,141:1427-1433.

2，OBrien KD, Allen MD, McDonald TO, et al. Vascular cell adhesion molecule-1 is expressed in human coronary atherosclerotic plaques. J Clin Invest, 1993, 92:945-951

收稿日期：1999-08-20