观察1996年4月至1997年9月我院老年肾病综合征住院患者肾活检组织中P选择素(CD62P)的表达分布,并以流式细胞仪分析其在周围血中表达水平。(1)老年肾病综合征组:16例,男10例,女6例;年龄60~69岁,平均64岁。均符合原发性肾病综合征诊断标准。16例均行肾活检,肾组织作常规光镜(HE、PAS、Masson、PASM染色)、免疫酶标(兔抗人IgG、IgA、IgM、C3、HBsAg等LSAB法检测,丹麦DAKO产品)和透射电镜检查。病理类型(按WHO1982年分型标准):系膜增生性肾炎6例,膜性肾病5例,膜增生性肾炎3例,局灶节段性肾小球硬化2例。病程0.5~36个月,16例均无肾功能失代偿表现。(2)非老年肾病综合征组:36例,为同期住院患者,男20例,女16例;年龄16~58岁,平均35岁。肾活检病理类型:系膜增生性肾炎16例,膜性肾病9例,膜增生性肾炎8例,局灶节段性肾小球硬化3例。病程0.5~42个月。(3)健康对照组:30例,为查体健康者。男16例,女14例;年龄60~71岁,平均64.6岁。肾活检组织设健康对照组8例,为肾移植术前健康供肾者肾组织。
方法:(1)周围血CD62P流式细胞测定:异硫氰酸荧光素(FITC)标记的单克隆抗体CD62P(鼠抗人抗体)及阴性对照抗体羊抗鼠IgG1-FITC,均为法国国际免疫公司产品。流式细胞仪:FACS can型,美国Becton Dickison公司生产。血样本的处理和流式细胞仪检测操作步骤见文献〔1〕。(2)肾活检组织CD62P表达测定:用冰冻切片直接免疫荧光法。
二、结果
1.周围血CD62P表达:老年肾病综合征组的CD62P表达量为(9.8±2.8)%,与健康对照组(3.3±1.1)%比较,差异有显著性〔t检验(下同),P<0.01〕;与非老年肾病综合征组(7.1±2.6)%比较,差异也有显著性(P<0.05)。
2.肾组织CD62P表达:老年肾病综合征组6例系膜增生性肾炎中4例表达,5例膜性肾病、3例膜增生性肾炎、2例局灶节段性肾小球硬化均有表达,即16例中14例在肾组织表达(87.5%);表达强度多介于(++)~(+++);表达部位多见于肾小球系膜区和毛细血管襻,其次为肾小管、间质小血管壁,且CD62P的表达部位与肾脏病理的病变部位和程度相一致(图1)。非老年肾病综合征组36例肾组织CD62P的表达部位与老年肾病综合征组基本相同,但表达程度较弱。健康对照组肾组织中则未见CD62P表达。
三、讨论
P选择素是粘附分子选择素中三大组分之一,介导中性粒细胞和单核细胞对内皮细胞和活化血小板粘附,并作为后者活化的表面标志〔2〕。近年来研究表明其在免疫识别、炎症反应、高凝状态、血栓形成诸过程中起重要作用〔3〕。老年肾病综合征患者存在免疫失调、微血管病变、高凝状态及血栓形成,且多数已有动脉硬化伴有动脉管壁增厚、管腔狭窄,在发生肾病综合征时则病变更为显著,CD62P作为一种重要物质,参与了炎症反应和活化血小板作用〔3〕。本组老年肾病综合征患者周围血及肾组织中CD62P表达量显著增高,在肾脏中的表达与病理损害部位和程度相一致,提示CD62P在老年人肾病综合征发病机制中具有重要作用,对本病高凝状态及炎症反应损伤的诊断与治疗具有重要意义。
图1老年肾病综合征患者肾活检病理为系膜增生性肾炎,
CD62P在肾小球系膜区、肾小管的表达↑,直接免疫荧光法×200
参考文献
1孙晓明,尹格平.实体瘤组织细胞粘附分子流式细胞研究方法的建立.中华医学检验杂志,1997,20:9-12.
2Abrams C, Shattil SJ. Immunological detection of activated platelets in clinical disorders. Thromb Haemostas, 1991,65:467-471.
3Sedlmayr P, Grobhaupt B, Muntean W, et al. Flow cytometric detection of intracellular platelet antigens. Cytometry, 1996,23:284-288.
(收稿:1998-04-29修回:1998-08-04)
