一、资料与方法
对象:(1)老年急性脑梗死(ACI)患者60例,为1996年4月~1997年8月我科住院患者,经头颅CT或MRI检查证实,均符合《全国第二届脑血管病会议修订的诊断标准》(1986年,苏州市)。均为男性,年龄60~79岁,平均68岁。(2)健康对照组24例,男性,年龄60~80岁,平均70岁。头颅CT扫描排除无症状性或腔隙性脑梗死。(3)按病情程度又分为病重和病轻2组:病重组34例,平均年龄66岁;病轻组26例,平均年龄69岁。(4)按患病后至入院时间分为:<6小时24例,平均年龄69岁;6~95小时19例,平均年龄66岁;≥96小时17例,平均年龄68.5岁。
方法:入院后次晨抽空腹肘静脉血3.5ml,放入2%乙二胺四乙酸二钠抗凝管中测定血浆中CD18含量。(1)特殊试剂:异硫氰酸荧光素(FITC)标记单克隆抗体,CD18(鼠抗人-FITC)及免疫阴性对照抗体(羊抗鼠IgG1-FITC),由法国国际免疫公司生产。(2)淋巴细胞制备:取肝素2ml抗凝血,与淋巴细胞分离液2ml混合,离心1 500r/min,15分钟,提取其中淋巴细胞层,再用磷酸盐缓冲液(PBS)清洗2次,弃上清液备用。(3)免疫标记:对照管提取血浆加CD18、再加IgG1-FITC羊抗鼠抗体20μl室温避光30分钟,离心1 500r/min,15分钟,PBS清洗1次,以去除未结合的荧光抗体。(4)流式细胞仪(美国BD公司生产FACSCAN型)检测,光源488nm的氢离子激光,上机前用标准微球调整仪器,变异系数<2%,上机后收集104个细胞,测试数据用美国BD公司产Macitosh 650计算机上Cell Quest, Plot软件程序分析。统计学方法:t检验。
二、结果
1.ACI组淋巴细胞膜表面CD18的含量45.37%±19.42%,高于对照组的13.86%±7.22%,两组比较差异有显著性(P<0.01)。
2.重病组淋巴细胞膜表面CD18含量51.31%±22.23%,高于病轻组的39.43%±16.46%,两组比较差异有显著性(P<0.05)。
3.病程长短与淋巴细胞膜表面CD18含量有关,病后<6、6~95和≥96小时CD18分别为55.23%±25.30%、46.15%±21.47%和39.05%±20.33%,有随病程延长逐渐下降的趋势。其中病后6小时CD18含量显著高于病后96小时的CD18含量,两组差异有显著性(P<0.05)。
三、讨论
整合素粘附分子都是由α、β两条链以非共价键连接而成的异二聚体(heterodimer)。按β链不同可将整合素分为8个亚族(β1~β8),β2是其中的1个亚族。β2整合素均表达在白细胞上,参与白细胞粘附依赖性反应。本组检测结果表明:ACI组淋巴细胞膜表面CD18的含量显著高于对照组,病情危重组又高于病轻组,病后6小时内CD18增高几乎是病后4天的1倍,有随病程延长逐渐下降的趋势。结果提示,整合素族β2-链CD18的含量与急性缺血性脑血管病及其他血栓性疾病关系密切,且在血栓形成倾向性疾病中随病情变化呈动态改变,故可将CD18作为早期诊断缺血性脑血管病的参考指标。
(收稿:1997-07-10修回:1998-05-15)
