摘要目的观察通补延衰方对衰老小鼠模型肝和胸腺两组织延缓衰老的作用。方法用D-半乳糖小鼠颈部皮下注射复制衰老小鼠模型，同时灌肠通补延衰方，1个月后取部分肝、胸腺组织用HE染色光镜和透射电镜进行观察。结果通补延衰方能预防和治疗衰老模型小鼠肝、胸腺两组织的老化。结论通补延衰方具有延缓衰老小鼠的作用。

Morphological observations of the aging mice model after treated by an unique recipe of Tongbuyanshuai

Zhou Lizhen,Zhao Feng,Zhi Daixin et al

(Dongzhimen Hospital,Beijing University of Traditional Chinese Medicine,Beijing 100070)

Abstract：ObjectiveTo investigate the influences of Tongbuyanshuai recipe on liver and thymus in aging model mice.MethodsHematoxylin eosin stain was used and morphologic changes related to aging in liver and thymus were observed with microscope and electron microscope.ResultsTongbuyanshuai recipe can prevent or reverse the aging in liver and thymus of the aging mice model.ConclusionsTongbuyanshuai recipe has functions of defering aging in mice model.

Key wordsTongbuyanshuai recipeAging modelMorphology

我们根据中医名家董建华教授多年运用通补法治疗老年病和延缓衰老的临床经验，提出脾肾两虚、胃肠郁滞、气血失和为衰老的中医机制，健脾补肾、通腑降浊、调和气血之通补法是中医延缓衰老的一条途径，并据此拟定了通补延衰方。通过临床及实验研究，证明此方具有较好延缓衰老之效。本文就形态学研究，报道其对衰老模型肝与胸腺衰老的防治作用。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1实验动物采用ICR品系小鼠，雌雄各半，体重为20±2 g，均由中国医科院动物繁殖中心提供。

1.1.2实验试剂及药品D-半乳糖由上海试剂二厂生产；通补延衰方由我院制剂室提供，配成每ml含生药2.6 g，封口置4℃冰箱保存备用。

1.2实验方法

1.2.1衰老动物模型的制备D-半乳糖用0.9%生理盐水稀释成10 mg/ml浓度，然后按每天每公斤体重80 mg剂量，给小鼠颈部皮下注射，连续1个月。

1.2.2实验分组随机分为正常对照组、模型组、预防实验组和治疗组4组。正常对照组给小鼠每天颈部皮下注射0.9%生理盐水0.2 ml，连续1个月。模型组造模方法同前。预防实验组从造模之日开始灌药，直至造模时间结束。通补延衰方预防组分为大、中、小剂量3组，大剂量组为每日每只灌服0.4 ml，中剂量组为0.2 ml，小剂量组为0.1 ml。以上剂量均按动物与人给药剂量的常规换算方法制定，分别为人的20、10和5倍。治疗实验组，是统一成模后开始灌药，连续1个月。通补延衰方治疗组用药剂量是根据预防实验结果选择的最佳量(0.2 ml/只.d^-1)。

1.2.3形态学观察方法小鼠剖腹后，取部分肝组织，以干冰速冻，恒温冷冻切片机切片，厚6 μm，作酶组织化学染色。取小块肝、胸腺组织固定于2.5%戊二醛液中，以待电镜检查。其余固定在10%的中性甲醛液中，作常规的取材、石蜡包埋、切片，切片厚4 μm，HE染色。

2结果

2.1HE染色光镜观察肝、胸腺组织学变化

2.1.1肝组织学变化模型组肝细胞胞浆明显疏松、肿胀，肝细胞广泛脂肪样变性，次中央静脉周围最为明显，并可见多数点状及灶性坏死。正常组肝细胞索排列整齐，肝细胞呈多边形，染色质稍疏松，细胞质丰富，细胞核较大，核仁明显，汇管区无炎性细胞浸润。通补延衰方治疗组肝细胞基本正常，部分肝细胞胞浆疏松，未见脂肪变性及坏死区。

2.1.2胸腺组织学变化模型组胸腺皮质及髓质均萎缩，皮、髓质分界不清，淋巴细胞及上皮性网状细胞减少，胸腺小体减少，可见脂肪组织及纤维组织增生。正常组胸腺皮、髓质区分清晰，皮质的淋巴细胞及上皮网状细胞密集，髓质中的淋巴细胞较稀疏。通补延衰方治疗组胸腺皮质厚度正常，未见萎缩，皮、髓质界限清晰，组织形态基本正常。

2.2光镜观察肝脏酶组织化学变化

2.2.1乳酸脱氢酶(SDH)SDH存在于线粒体内膜上，光镜下酶活性部位于细胞浆内呈蓝紫色细颗粒。

模型组肝细胞浆内可见淡灰蓝色颗粒，SDH酶活性明显减弱，反应强度+。正常组肝细胞浆内可见均匀、深蓝色颗粒，细胞核不着色，SDH酶活性强，反应强度～。通补延衰方治疗组肝细胞浆内酶活性明显恢复，可见均匀的蓝色或深蓝色颗粒分布，SDH酶活性强，反应强度～。

2.2.2葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)模型组肝细胞浆内可见淡黄色颗粒分布，反应强度+。正常组肝细胞浆内可见均匀、棕黄色颗粒分布，核反应呈阴性，反应强度～。通补延衰方治疗组肝细胞浆内可见均匀、棕黄色颗粒分布，反应强度～。

2.2.3单胺氧化酶(MAO)模型组肝细胞浆内可见浅蓝色颗粒分布，反应强度+。正常组肝细胞浆内可见均匀灰蓝色颗粒分布，反应强度～。通补延衰方治疗组肝细胞浆内可见灰蓝色颗粒分布，反应强度～。

2.3透射电镜观察肝、胸腺组织超微结构变化

2.3.1胸腺超微结构观察结果模型组淋巴细胞的细胞质内线粒体肿胀变性，嵴消失，游离核糖体含量减少。上皮性网状细胞的细胞核内染色质浓缩，核周间隙加大，核膜凝集、坏死，线粒体显著变性肿胀，嵴断裂或消失，空泡化，有的呈髓峭样改变，内质网明显扩张。正常组上皮性网状细胞结构清晰，线粒体无肿胀变性，粗面内质网与滑面内质网分布正常，有游离核糖体及张力微粒，细胞核内可见核仁，常染色质均匀分布于核质内，异染色质分布于核周围。淋巴细胞线粒体及内质网无变性现象。通补延衰方治疗组胸腺结构完整，上皮网状细胞核无明显变形和染色质浓缩，淋巴细胞形态基本正常。个别线粒体有髓峭样改变，内质网少数略有扩张。

2.3.2肝脏超微结构观察结果模型组肝细胞线粒体高度肿胀、增生，排列紊乱，嵴消失，内质网扩张，肝糖元颗粒减少，可见脂滴，核固缩，核周间隙加大。正常组肝细胞内有很丰富细胞器及内含物，可见成群的粗面内质网及滑面内质网分布于细胞质内，在核附近可见发达的高尔基复合体，线粒体丰富，呈杆状及半圆形，嵴清楚，可见溶酶体、微体及糖元颗粒，核内常染色质及异染色质分布正常。通补延衰方治疗组肝细胞质内大部分线粒体结构基本恢复正常，无明显肿胀，呈杆状及圆形，大小不一，数量较多；线粒体嵴清楚可见，基质呈颗粒状；粗面及滑面内质网除极少有扩张外，大部分无明显扩张，成群存在，可见糖元颗粒、脂滴及微体。

3讨论

3.1实验性衰老动物模型的选择衰老“代谢失调学说”被公认为一种衰老综合学说。据此有人研究出D-半乳糖亚急性衰老小鼠模型，并成功地观察到类似衰老的多个组织系统功能改变，而且其衰老程度接近小鼠21月龄水平，被认为是当前抗衰老研究的较好模型。

3.2通补延衰方延缓肝脏与胸腺的老化通补延衰方是由人参、肉苁蓉、枳实、酒军等药组成，其性味平和、温而不燥、补而不腻、通而不泻，无阴阳偏盛之弊，阴阳气血脏腑可补，故能扶正固本，延缓肝脏和胸腺衰老，益寿延年。实验结果证实，通补延衰方能增强肝SDH、G-6-P、MAO的活性，说明其能通过肝细胞的有氧代谢和糖元代谢，能增强肝脏的功能，对改善衰老小鼠的健康状况无疑是有益的。

国家科委重点科研项目(010)

作者简介：周丽珍，女，32岁，医学博士，主治医师，从事老年病、热病的研究

收稿日期：1998-12-31

修回日期：1999-05-24