自1997年10月日本学者Nishizawa等^［1］发表第一篇关于发现TTV的论文以来，许多国家开展了TTV的研究。现就文献报道以及我们的工作，对TTV研究作一简要回顾，并对其今后的研究方向提出一些粗浅看法。

一、TTV的发现及其基本特征：长期以来，人们一直在寻找非甲～非戊型肝炎的病因，1995年发现HGV，使大约10%～20%的非甲～非戊型肝炎的病因获得解释，但目前对此有不同看法。1997年日本学者^［2］通过流行病学观察，运用代表性差异分析技术(Representational difference analysis)，终于从一个输血后肝炎病人(TT)血清中克隆到一个500bp的片段(N22)。通过分子流行病学研究，证实了N22与输血后肝炎的高度相关性，并将该基因片段可能代表的病毒以病人名字命名为TTV，从而揭开TTV研究的序幕。同年，Okamoto等^［2］报道了TTV全基因，并分析TTV在人群中的分布，第一次为人们展示了TTV的真面目。Okamoto^［2］的资料显示，TTV是一个3.7kb的无包膜的单股DNA病毒，可能归类于细小病毒科(Parvoviridae)。蔗糖浮力密度为1.26g/cm³，氯化铯浮力密度为1.31～1.32g/cm³。TTV含两个开放阅读框架(ORF)，ORF1位于该基因组的589～2 898位核苷酸，编码770个氨基酸，其N端为富含精氨酸的高亲水区；ORF2位于107～712位核苷酸，编码202个氨基酸。1999年，Mushahwar等^［3］对TTV作了更为系统的研究，他们的结果显示，TTV是一个环行负股DNA病毒，全长3 852个核苷酸，比Okamoto所测TTV基因长113个核苷酸(其中GC比例为89%)，氯化铯浮力密度为1.31～1.34g/cm³，TTV颗粒大小为30～50nm，其基因结构类似于圆环病毒中的鸡贫血病毒。同时考虑到TTV与任何已知病毒都不一致，故Mushahwar等^［3］建议将TTV列为单独一个病毒科——Circinoviridae(圆环病毒科)。同年，日本学者Miyata等^［4］也证实，Okamoto等人所测的TTV基因缺113个核苷酸，但他们认为，TTV应分类于圆环病毒科(Circovirdae)，是人类第一个圆环病毒。一般认为，TTV有两个阅读框架，但究竟有几个，目前尚无定论。

二、流行病学研究：到目前为止，TTV大部分研究限于流行病学调查。现有资料表明，TTV分布甚为广泛。Okamoto^［2］早期报道显示，在非甲～非戊型暴发性肝炎中，47%(9/19)为TTV阳性；非甲～非戊型慢性肝病患者的TTV阳性率为46%(41/90)，其中慢性肝炎为47%(15/32)，肝硬化为48%(19/40)，肝癌为39%(7/18)；血友病患者为46%(26/57)，献血员为12%(34/290)。我们实验室与北京地坛医院、佑安医院、深圳保安血站的合作研究表明^［5］：非甲～非庚型肝炎病人中，TTV阳性率为43%(48/112)，甲型～庚型肝炎病人中，阳性率为2.9%(3/102)，ALT升高的献血员阳性率为34.6%(9/26)，ALT正常的献血员为16.9%(28/166)。骆抗先等^［6］报道，武汉某学校一大批原因不明的ALT异常学员中，有相当比例TTV阳性者。英国Simmonds^［7］与Naoumov^［8］等人的资料提示，2%的苏格兰献血员带有TTV，10%的英格兰人携带TTV，50%的血液制品可能已被TTV污染，20%的TTV携带者可能患有严重肝病。泰国Poovorawan等^［9］在慢性非甲～非庚型肝炎病人、吸毒人群、肝癌病人、地中海贫血病人中均查出TTV。美国Mushahwar等^［3］报道，约11%的志愿献血者，12%的职业献血员和17%的静脉吸毒者TTV DNA阳性。德国Viazov等^［10］报道，约13%的志愿献血员有TTV感染。据此，可以认为，TTV在一般人群中的携带率有可能高于10%。

通过血液(包括献血、血制品、肾透析、骨髓移植等)传播TTV已成为共识^［11］。此外，粪口途径也是TTV重要传播途径^［12］。日本Ukita^［13］发现，病人引流的胆汁中TTV滴度是血清中的10～100倍，粪便中也能检出TTV，且胆汁中的TTV的氯化铯浮力密度与粪便中的TTV完全一致。国内也有类似报道。英国MacDonald等^［14］发现，妓女和男性同性恋者的TTV阳性率与对照组无显著差别，认为性传播在TTV的流行中不是主要因素。

TTV持续感染是其特征之一。日本的一个回顾性调查表明，TTV至少可携带5年以上，感染TTV后半年内消失的只占少数^［15］。

TTV是否致病仍是一个悬而未决的问题^{［16，17］}，由于TTV是在急性非甲～非庚型肝炎病人血清中首先发现的，因此，认为是一种与输血后肝炎相关的病毒。随着全世界几十次对比研究发现，在各型肝炎病人及各种人群中，TTV感染率差异无显著性。因此，近年来大多数研究认为TTV与肝炎的相关性不大，即使有，也不如HBV、HCV引起的肝炎那样严重。因此，关于TTV致病性研究的方法及范围还需扩大，以便最后确定其致病性。如果TTV不是非甲～非庚型肝炎的病原，则肯定存在尚未发现的新的致病因子，需要大力研究。

三、基因变异：Okamoto等^［2］根据TTV 1 902～2 257位核苷酸之间356bp的序列，分析了日本78株TTV DNA序列。认为可分为两组：1组76株，2组2株，该两组的核苷酸变异大于30%。两组内根据核苷酸变异为11%～15%，每组又分为2个亚组，即G1a、G1b、G2a、G2b。Mushahwar等^［3］分析了全世界151个分离株，认为TTV应分成3个基因型，即1、2、3型，其中2型又可分成2.1、2.2两亚型；Viazov等^［10］分析全世界17个国家76株TTV，认为应分成两大组，即：TTV1和TTV2，第一组包括2个亚组，第二组包括4个亚组。Tanaka等^［18］用限制性片段长度多态性分析全世界93株TTV，认为应分成6个基因型。英国Simmonds等^［7］从献血员中克隆的包含97个氨基酸的10株TTV，其氨基酸变异为12.3%(12/97)。泰国Poovorawan等^［9］克隆的6株TTV，其ORF1部分氨基酸的变异为7.7%(7/90)。德国Hoehne等^［19］报告6株TTV，其ORF1部分氨基酸的变异高达40%(31/76)。我们测定的第一个中国人TTV序列(3 739bp)，与日本的TTV序列比较，两者之间的氨基酸同源性超过95%。总之，由于目前无统一的分型方法，或者资料来源不全，也许最主要的原因是目前的分型均非基于TTV全基因，因此，TTV基因型尚未最后定论。目前一致的意见是：TTV的基因型和TTV是否存在高变区均应在比较不同地区TTV全基因组序列后，方可得出公认的结论。

四、诊断和治疗研究：目前，TTV的诊断主要依据PCR。根据我们的研究，有两点值得注意：(1)引物设计：最好设计不同区段引物，互为补充，因不同区段引物检出率差异较大；(2)DNA提取：可能是由于TTV在感染者血清中滴度差别较大(2～3个数量级)，或者TTV是单链DNA病毒，或者两者兼而有之，常规提取DNA的方法漏检甚多。经比较，美国Biotronics Tech.Corp公司的STG试剂为最好。

最近，Tsuda等^［20］用免疫沉淀法检测血清中抗-TTV，6名TTV DNA阳性献血员中，有1名血清抗-TTV阳性(17%，1/6)；而血清TTV DNA阴性的38名献血员中，11名抗-TTV阳性(29%，11/38)。但该法技术上较为复杂，且易出现实验误差，不宜用于大规模筛选。因此，目前急需建立抗-TTV酶联免疫法(EIA)。此外，有人正在探索斑点杂交法检测血清中的TTV DNA。

关于TTV的治疗，Chayama等^［21］报告用干扰素治疗16例混合感染TTV和HCV的病人显示，干扰素对HCV有效，对TTV无效。但尚需要进一步证实。

五、动物模型：我们从1997年开始用10份临床确诊为非甲～非庚型肝炎病人血清感染10只猕猴，回顾性研究发现，其中4份人血清为TTV阳性，接种该4份血清的猕猴均感染TTV(经猕猴TTV分离株序列分析证实)，但猕猴的肝炎症状不明显。猴被处死之前已接种人血清6个月，但TTV仍阳性，提示TTV可引起持续性感染。这一结果已被猕猴肝组织TTV特异性探针原位杂交技术所证实。猕猴实验感染模型的建立为探索TTV的致病性、TTV的复制部位、抗TTV药物效果评价和疫苗研制提供了条件。最近，Mushahwar等^［3］用只含TTV的病人血清接种黑猩猩，1只接种2ml，另1只接种20ml，TTV滴度为1×10³/ml～2×10³/ml。接种20ml血清的黑猩猩于第93天可测到TTV DNA，但第226天时TTV DNA阴转；接种2ml血清的黑猩猩于第149天可测到TTV DNA，但第219天时TTV DNA阴转。该2只黑猩猩未出现病毒性肝炎的生化和组织学证据，是否还有更经济的动物模型，值得进一步研究。

六、问题和展望：目前，我国TTV急需研究的课题是：(1)不同地区、不同人群TTV感染的流行病学；(2)不同地区TTV全基因序列比较；(3)抗-TTV EIA诊断方法的建立；(3)单纯TTV感染的临床特点及治疗方法；(4)TTV的复制部位和致病性。

参考文献

1Nishizawa T,Okamoto H,Konishi K，et al.A novel DNA virus (TTV) associated with elevated transaminase levels in posttransfusion hepatitis of unknown etiology. Biochem Biophys Res Commun,1998,241∶92-97.

2Okamoto H,Nishizawa T,Kato N,et al. Molecular cloning and characterization of a novel DNA virus (TTV) associated with posttransfusion hepatitis of unknown etiology. Hepatol Res,1998,10∶1-16.

3Mushahwar IK,Erker JC,Muerhoff AS,et al.Molecular and biophysical charaterization of TT virus:Evidence for a new virus family infecting humans. PNAS,1999,86∶3177-3182.

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