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随机扩增多态性DNA在院内感染性肺炎逆行感染途径研究中的

2022-07-29
来源:求医网
关于院内感染性肺炎(NP)是否存在胃→咽→下呼吸道的逆行感染途径尚缺乏基因组DNA水平上的确凿证据。1998年6月至1999年3月选择三所教学医院脑外科、神经内科行气管切开或插管的患者,按全国医院感染监控中心制订的诊断标准确诊NP,年龄≤15岁,确诊为肺部感染时间≤48小时者除外。发生NP的归为病例组,未发生NP的归为对照组。二组均衡性检验具有良好的可比性。用PSB采集下呼吸道分泌物,同时采集空腹胃液作细菌定量培养并测定pH值,每1~2天一次。对上述来自胃和下呼吸道细菌表型鉴定结果相同者,作质粒DNA、酶切图谱分型及随机扩增多态性DNA(RAPD)技术分析。

纳入研究的108例患者中,男84例,女24例,年龄16~83岁,平均年龄(47.7±14.6)岁,将确诊为肺部感染的50例归为病例组,NP的发生率为46.3%(50/108)。PSB采样有76例次出现有诊断意义(>103cfu/ml)的结果,分离到76株细菌,包括革兰氏阳性菌23株,阴性菌45株,真菌8株。胃液细菌培养分离到68株菌,包括革兰氏阳性菌11株,阴性菌50株,真菌7株。有22株菌(11对,分别来自11例患者的胃部和肺部)在胃液分离鉴定出1~2天后,在肺PSB也分离到相同的细菌,且连续2~3次采样均得到一致的结果。对其中6名患者将美蓝经胃管注入胃内,第2天在患者咽部用咽拭子可检出蓝色分泌物,PSB在下呼吸道也有蓝色分泌物检出,初步证明有逆行途径存在。逆行感染发生率为10.2%(11/108),占感染病例的22%(11/50)。来源于同一病人的胃、肺部表型鉴定结果相同的菌株,其质粒DNA图谱、Hind Ⅲ酶切电泳图谱完全相同,提示它们在质粒DNA水平具有很高的同源性。更有意义的是,RAPD在各对应菌株之间得到完全相同的扩增带,MINTS聚类分析相似系数为100%,进一步在基因组DNA水平说明它们很可能为同源菌株。至此,由细菌表型特征到基因组DNA水平均证明存在胃→咽→下呼吸道逆行感染途径。

在测定胃液pH值的同时,计数该pH环境下胃内细菌总数。结果表明随着胃液pH值的升高,胃内定植细菌总数明显增加,两者呈显著相关(P<0.01)。病例组pH均值4.89±1.48,对照组pH均值3.27±1.19,P<0.01。按pH≥4及pH<4将病例组分为二组,当pH<4时,NP的发生占26%,pH≥4时,NP的发生占74%,χ2=32.94,P<0.01,即随着胃液pH值的升高,NP的发生率显著增大。

(收稿:1999-06-15)