O157大肠杆菌是致泻性大肠杆菌的一种主要血清型，能引起人类出血性腹泻，在儿童和老年患者中可能并发溶血性尿毒症和紫癜而受到重视。自从1982年首次从食用牛肉汉堡包而导致出血性腹泻患者粪便和汉堡包中分离到此菌后，相继在美国、英国、加拿大、德国和日本发生多次由O157菌株引起腹泻的爆发和流行。如美国每年有2万多人感染，30多起爆发；1996年日本发生上万儿童感染，19人死亡。我国1988年首次报告O157感染的病例。为进一步搞清我国O157菌株的流行情况，必须建立一套快速、灵敏、特异的检测方法。

一、快速筛检O157菌株试纸：用自行研制的MUG(四甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷)和G(四甲基伞形酮-β-D-半乳糖甙)两种试纸联合检测O157菌株及一般大肠杆菌(E.coli ATCC35218)。O157菌为G试纸阳性，MUG试纸阴性。而一般大肠杆菌G试纸阳性，但MUG试纸为阳性。这说明上述两种菌均属大肠杆菌，但O157株虽存在uidA基因，能编码翻译β-葡萄糖醛酸苷酶，但无活性，所以不能水解MUG产生荧光。用上述两种滤纸条1～3小时即可见结果，并可代替吲哚试验。其他非大肠杆菌如鸡沙门氏菌、鼠伤寒杆菌、绿脓假单胞菌、白色念珠菌和金黄色葡萄球菌均不能分解G和MUG。

二、用PCR技术检测O157菌株志贺样毒素(VT)：用MK1(5'TTTACGATAGACTTCTCTGA

C3')和MK2(5'CACATATAATTATTTCGCTC3')在DNA扩增仪上循环35次。O157产毒株可扩增出224bp的特异条带，而O157非产毒株、一般大肠菌、沙门氏菌和白色念珠菌均为阴性。

三、免疫磁珠(IMS)分离O157菌：由于粪便中含有不同种属大肠杆菌，增菌或山梨醇-麦康凯琼脂(SMAC)上均有相当多的杂菌，应用包裹在磁珠上的大肠杆菌O157株特异性抗体与增菌液中O157菌株作用，然后用磁板将免疫磁珠沉淀，使O157菌株分离。我们曾用此方法检测牛肉103份、猪肉103份、羊肉73份和腹泻标本133份，结果在牛肉中检出4份O157菌，而传统方法只查到2份。

四、应用Chromagar^®琼脂检出O157菌：该琼脂是一种商品。凡O157菌培养后呈紫红色，一般大肠杆菌呈蓝色，鸡沙门氏菌呈浅紫红色，鼠伤寒杆菌、白色念珠菌、绿脓假单胞菌呈无色集落。菌落颜色持久，4℃冰箱中数月不变。

五、用脉冲场电泳(PFGE)进行基因分析：用低熔点琼脂糖对6株大肠菌O157菌株进行包埋、蛋白酶K消化、xbaⅠ酶切后，进行PFGE分析。结果显示从上海牛肉中分离的4株O157散发株和2株O157产毒和不产毒标准株的PFGE图谱有明显差别，不同条带数超过4～6条以上。提示各受试菌株相互独立，并非同一来源。

六、大肠杆菌O157菌株快速检测流程的建立：检样为每克含25ml食品样品或5～10g粪便，置于含有新生霉素的增菌液中(37g增菌培养基加1 000ml重蒸水)，摇匀后，121℃高压灭菌15分钟，冷却后加10%新生霉素PBS溶液200μl，摇匀分装。

37℃温浴6小时后用免疫磁珠捕获，接种到含先锋霉素(1mg/ml,50μl)和亚碲酸钾(50mg/ml,50μl)混匀后制成的山梨醇-麦康凯培养基(CT-SMAC)平板上，培养37℃ 18～24小时。挑选可疑菌落接种到下述两个对象上：一部分可疑集落接种到含MUG和G试条的试管中(内含灭菌的PBS 2ml)，37℃ 3小时后在365nm紫外光灯下观察有无荧光；另一部分集落接种到Chromagar^○R琼脂平板上37℃ 24小时挑选可疑集落作O157特异抗血清凝集，作聚合酶链反应(PCR)扩增，看有无志贺类毒素(VT)，最后可用Vitek机器测各种生化试验，查出菌株用PFGE分类。

(收稿：1999-03-10修回：1999-06-07)