关键词: 斯氏狸殖吸虫特异性抗体

[摘要]目的观察斯氏狸殖吸虫在大鼠体内发育过程中的血清特异性抗体水平动态变化。方法用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测感染斯氏狸殖吸虫大鼠在不同时期的特异性的血清抗体。结果大鼠在感染后第45天检测到抗囊蚴抗体且抗体水平逐渐升高，60天达到最高，以后略有下降并维持一定水平，直至感染结束。在感染后的第80天开始检测到抗成虫抗体，但抗体滴度一直处于较低水平，感染结束后均在4只试验大鼠肺部查到成虫。结论大白鼠感染斯氏狸殖吸虫后血清抗体的变化具有期特异性。

中图分类号：R532.22文献标识码：A

文章编号：1007－158X(2000)04－0198－03

Observation on the change of specific antibodies in wistar rats infected with Parumogonimus skrjabini

TANG Lina,CHEN Zaoyi,LIU Luxia,et al

（Guizhou Provincial Institute of Parasitic Disease,Guiyang 550001）

[Abstract] Objective To study the changes of serum specific antibody level in wistar rats infected with Parumogonimus skrjabini.Methods The specific antibodies against Parumogonimus skrjabini on different development stage in rats were determined by ELISA.Results The antibody against metacercaria in rat serum was found after infection 45 days and the antibody titer rose gradually.The high antibody level was examined in 60 days after infection till the test finished.The antibody against adult worm was determined after infection 80 days by ELISA,but the antibody level was low.The adult worms of Parumogonimus skrjabini were obtained in the lungs from infected wistar rats.Conclusion The antibody changes in rats infected with Parumogonimus skrjabini kept stage specificity in different development period.

[Key words]Parumogonimus skrjabini Specific antibody

各种并殖吸虫对宿主具不同的寄生适应性。许多学者对各种并殖吸虫在大鼠体内的发育进行了研究，表明多数并殖吸虫可在大鼠体内多部位寄生且发育成熟^[1]。大鼠为斯氏狸殖吸虫的转续宿主，也有学者对斯氏狸殖吸虫与大鼠之间的生物学关系和宿主相容性进行了实验研究，也表明斯氏狸殖吸虫在鼠体内可多部位寄生且能发育成熟^[2]。为了解该虫在鼠体内发育过程中血清抗体的动态变化，本实验以斯氏狸殖吸虫的囊蚴感染Wistar大白鼠并以囊蚴和成虫抗原用ELISA的方法检测感染斯氏狸殖吸虫大鼠在不同时期的血清特异性抗体变化。现将结果报告如下。

1材料与方法

1.1囊蚴在我省斯氏狸殖吸虫流行区的绥阳县采集淡水蟹，从中分离囊蚴。

1.2抗原的制备

1.2.1囊蚴抗原的制备将上述分离的囊蚴加入适量的PBS缓冲液后置于冰浴中研磨，超声捣碎，反复冻溶，离心，其上清液即为囊蚴的可溶性抗原。－20℃保存备用。

1.2.2成虫抗原的制备斯氏狸殖吸虫成虫由本室以往用斯氏狸殖吸虫囊蚴感染家犬而得。抗原制备方法同上。

1.3实验动物Wistar大白鼠由本站实验动物科提供。

1.4感染动物及血清采集于感染前先从鼠尾取血分离血清作对照。用斯氏狸殖吸虫囊蚴15～20个经口感染4只Wistar大白鼠。分别于感染后第15天，45天，60天，80天，100天，120天(感染结束)取鼠血，分离血清，置于－20℃保存备用。

1.5酶联免疫吸附试验(ELISA)将上述抗原用碳酸钠缓冲液(PH9.6)1:100稀释，按每孔50μl包被96孔酶标板，4℃过夜，血清稀释浓度为1:50～1:1600，第二抗体为辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG结合物(华美公司提供)。底物显色剂为TBM，5min后用2NH₂SO₄终止反应，实验设空白及阴性对照。全部待测血清双孔进行。450nm测定OD值。

2结果

本实验用斯氏狸殖吸虫囊蚴感染了4只大白鼠，分别于感染后15天，45天，60天，80天，100天，120天(感染结束)分别采血分离血清。用ELISA检测抗囊蚴和抗成虫血清抗体。结果显示，感染后15天4只鼠均未测到抗体，第45天出现抗囊蚴抗体，且随时间的推移抗体水平逐渐上升，60天达到最高峰，以后略有下降并维持在一定水平，直至观察结束。而抗成虫抗体在感染后第80天开始出现，但滴度较低，以后逐渐升高，见图1。感染结束后解剖大鼠，4只感染鼠均在肺部发现一个或多个虫囊，除1号大鼠虫囊内未发现虫卵外，其余鼠虫囊囊液中充满虫卵。3号鼠检出6条成虫,余感染鼠各检出2条成虫。其它脏器未发现虫囊。

图1感染斯氏狸殖吸虫大鼠血清特异性抗体变化

3讨论

并殖吸虫的囊蚴、童虫及成虫均具抗原性^[3]，所以虫体在宿主体内生长发育过程中，可刺激机体产生相应的免疫应答。本实验检测感染斯氏狸殖吸虫大鼠在不同时期的血清抗体水平结果也说明其抗体变化具有期的特异性。在感染初期首先出现抗囊蚴抗体，其抗体水平随时间推移而逐步上升，以后维持在一定水平，直到观察结束。成虫抗体较囊蚴抗体出现晚，约在感染第80天出现，但反应较弱，直到观察结束最高抗体滴度为1：50。而3号鼠抗体水平较其它鼠高，最高抗体滴度达1：200，是否可间接说明抗成虫抗体水平与鼠体内成虫的负荷有关。本实验感染的4只大鼠的抗囊蚴抗体水平无明显差异。此结果与章子豪等报道的感染卫氏并殖吸虫后大鼠血清抗体水平的动态变化相似^[4]。本实验鼠血清抗体水平的变化反映了斯氏狸殖吸虫在大鼠体内生长发育的过程，并具期特异性。同时也表明了斯氏狸殖吸虫囊蚴和成虫间具共同和特异性抗原。

其它学者在斯氏狸殖吸虫在大鼠体内发育的实验研究中，发现斯氏狸殖吸虫在大鼠体内可多部位寄生并造成大鼠多器官损害^[1,2]。而本实验在尸检4只感染鼠时，仅在肺部发现虫囊，肝及其它部位未查见虫囊。其感染受累部位的多少是否与感染囊蚴的数量有关，还有待于进一步的实验观察。

作者简介：唐丽娜(1965－)，女，四川省人，主管医师，主要从事寄生虫病防治研究工作。

参考文献

1，严涛，李国良，董苌安.异盘并殖吸虫在大鼠体内发育的实验研究[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志，1998，16(2)：126－129

2，严涛，周宪民，董苌安.斯氏狸殖吸虫在大鼠体内多部位寄生与宿主转换的实验研究[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志，1991，9(3)：202－205

3，李允鹤主编.寄生虫病免疫学及免疫诊断[M].南京：江苏科学出版社，1991

4，章了豪，沈一平，吴观陵,等.犬和大鼠感染斯氏并殖吸虫后的抗体反应动态[J].上海免疫学杂志，1982，2(4):6－9

2000－04－13收稿。2000－05－20修回