将AM的DMEM悬液定量分装于平底培养皿,置于一可以检测细胞发光的装置中,37℃恒温培养,同时用已知浓度的钢瓶气连续通过培养容器染毒细胞和用SHG-1型生物化学发光仪随时检测培养皿自发光,培养结束后用染料排除法镜检细胞存活率。
结果:(1)用本法测得AM培养物的自主发光约每皿3~4cpm;(2)煮沸细胞的自主发光比活细胞强;(3)99.1% o2和0.1% CO分别具有促进和抑制AM自发光的作用;(4)浓度大于0.3mmol/L vitC能明显增强培养物自主发光和促进培养AM死亡,GSH的作用不明显;(5)GSH和低浓度VitC能降低由99.1% o2引起的培养AM自发光增强,并对氮气培养AM之存活显示某种程度的保护。
结果表明:(1)虽然本装置确实测得离体培养细胞有微弱发光,但此种发光并非全由细胞代谢活动所产生,因为煮沸AM能进一步增强发光,暗示所测AM之自发光可能来自主接触空气细胞的脂质氧化反应。氧化性和还原性气体直接影响AM自发光的结果支持这一观点;(2)本研究测得高浓VitC能增强离体细胞自主发光,同时显示对AM具有明显毒害,说明外源高浓度VitC可以通过促进细胞脂质过氧化而加速细胞死亡。但低浓度VitC抑制高浓度O2培养AM之发光增强说明,VitC具有取决于浓度的抗氧化和促氧化双向作用;(3)GSH是一种内源抗氧化剂,所以给予外源GSH未对培养细胞产生太大影响,但是发现GSH与低浓度VitC能对氮气培养AM之存活提供某种程度的保护,说明两者在体内除执行抗氧化功能外,可能还有其他生理作用。
