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【中图分类号】R322.5【文献标识码】A【文章编号】0529-1356(2000)03-212
DISTRIBUTION OF SYNAPTOPHYSIN, S-100 PROTEIN AND NSE
IMMUNOREACTIVE NERVE FIBERS IN HUMAN THYMUS
LU¨ shi-jun, LIU Yu-qing, ZHANG Wei-dong, HUANG Yan, GUO Ai-hua,WU Hong-juan,SUN yong-hong
Department of Pathology
Department of Histology and Embryology, Weifang Medical College,Weifang 261042,China
【Abstract】ObjectiveTo investigate the innervation of synaptophysin,S-100 protein,neuronal specific enolase(NSE) immunoreactive nerve fibers and the distribution of immunoreactive cells and to provide morphologic data for the immune neuro-endocrine interactions in thymus.MethodsThirty samples of normal thymus were fixed in 10% formal in and embedded in paraffin,stained by immunohistochemical ABC methods. ResultsSynaptophysin,S-100 protein and NSE immunoreactive nerve fibers presented as varicose and linear profiles travelled from thymic capsule to cortex along lobular septa and blood vessels,then extented to thymic medullary regions to form the network of nerve fibers.Some immunoreactive nerve fibers travelling around small blood vessels formed nerve fiber plexus.It showed also that synaptophysin,S-100 protein and NSE immunoreactive cells distributed dispersely in human thymus. ConclusionIt might be possible that the neuro-immuno-endocrine interaction and regulation existed in human thymus.
【Key words】Synaptophysin; NSE; S-100 protein;Immunohistochemistry;Human thymus
神经、内分泌和免疫系统通过神经递质、肽类激素和细胞因子相互影响和相互调节，构成神经内分泌免疫网络［1～3］。胸腺作为免疫系统的中枢器官和内分泌器官在神经内分泌免疫网络中具有特殊重要的地位。因而，近年来关于胸腺与神经内分泌系统相互作用的研究日趋重视，并提出了胸腺神经内分泌网络(thymus-neuroendocrine network)的概念［4］。突触体素［5］(synaptophysin)是提纯突触小泡过程中获得的多糖膜结构蛋白，它广泛分布在神经终末和神经内分泌组织中，在神经细胞中则主要存在于含经典神经递质的小型突触小泡膜内；NSE 是神经组织的标志。我们观察了人胸腺突触体素、S-100蛋白、神经特异性烯醇化酶(NSE)免疫反应神经纤维的分布，为胸腺的神经内分泌调节提供更多的形态学基础。
材料和方法
1. 标本来源及制备
选取因猝死、意外死亡的新生儿、儿童和成人尸检正常胸腺组织30例，所有标本经10%福尔马林固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片。
2. 免疫组织化学ABC法
(1)取上述组织石蜡切片，常规脱蜡至水(其中75%酒精后，用3%H2O2作用30min);(2)0.1%胰蛋白酶在室温下消化10min;(3)滴加牛血清(1∶30)；(4)分别滴加兔抗人突触体素抗体(1∶100)、兔抗人S-100蛋白抗体(1∶200)，兔抗人NSE抗体(1∶150)，4℃过夜；(5)先后滴加生物素标记的二抗和ABC复合物，37℃ 45min；(6)0.05% DAB加0.01%H2O2显色，时间7～10min(ABC试剂盒及以上各种抗体均 购自北京中山生物技术有限公司)，苏木素复染；(7)脱水、透明、封片。
每种染色分别设立阳性对照和阴性对照。阳性对照：突触体素、S-100蛋白、NSE以脑组织及胃肠肌间神经丛神经元及神经纤维为阳性对照。阴性对照：用PBS代替一抗为阴性对照。
结果
阳性对照片免疫反应阳性部位呈棕黄色，阴性对照片未见着色。突触体素免疫反应神经纤维呈棕黄色细丝、串珠状沿着胸腺被膜结缔组织的小叶间隔、小血管进入到胸腺皮质，穿行于淋巴细胞之间，神经纤维再进一步分支延伸到髓质，一些神经纤维形成神经纤维网(图1，5)。免疫反应神经纤维围绕小血管壁走行，形成血管周围神经丛(图6)。在胸腺淋巴组织中散在分布突触体素免疫反应细胞，细胞呈圆形、椭圆形或呈梭形；细胞核呈圆形位于中央，胞浆呈棕黄色(图2)。NSE免疫反应神经纤维在胸腺的分布与突触体素免疫反应神经纤维分布基本一致(图7，8)。在胸腺小体周围及胸腺皮质内也有NSE免疫反应细胞，细胞呈圆形、椭圆形或梭形，胞浆呈棕黄色(图4)。S-100蛋白免疫反应神经纤维主要沿着血管壁分布，并有神经鞘样细胞。胸腺皮质、髓质组织中也有S-100蛋白免疫反应神经纤维。在胸腺的皮质、髓质和胸腺小体周围有S-100蛋白免疫反应细胞，细胞呈圆形、椭圆形或梭形。部分胞浆有突起，细胞核呈圆形位于细胞中央，胞浆呈棕黄色(图3)。在胸腺小体及脂肪组织内尚未查见免疫反应神经纤维的支配。
讨论
免疫器官的神经支配及神经纤维与免疫活性细胞相互关系的研究日益受到重视。胸腺的神经分布比较复杂，主要受植物神经支配，迷走神经、膈神经、喉下神经和舌下神经降支均发出纤维到达胸腺。Felten等［6］报道了哺乳类动物胸腺内去甲肾上腺素能神经纤维沿着小血管在皮质外层进入皮质区，分布到实质细胞区域。也有报告在胸腺被膜下皮质区和皮髓质交界处发现乙酰胆碱脂酶阳性的神经纤维分布。王新亭等［7］采用银染改良法观察了大鼠胸腺神经纤维的分布。张金山等［8］研究了豚鼠胸腺含P物质、降钙素基因相关肽和神经肽丫神经的分布和定位。国外学者曾用免疫荧光法证明胸腺上皮细胞能产生某些递质样物质，如血管活性肠肽(VIP)、加压素。Gulati等［9］用组织化学和免疫组织化学方法，发现鸡胸腺小叶间隔有氮能(nitrergic)、肽能、P物质阳性神经纤维和神经元样细胞，并证实这些细胞具有神经元的标志(NSE)。Atoji［10］最近发现鸡胸腺内分泌细胞内存在神经肽，提出胸腺内分泌细胞和上皮细胞通过神经加压素、神经肽丫、血管活性肠肽、P物质等介导而发生相互作用。关于胸腺的神经内分泌研究，国外学者多集中于肽能、去甲肾上腺素能神经的分布，而对内分泌细胞研究仅限于动物实验。国内学者仅通过动物实验观察了胸腺内肽能神经纤维的分布。我们观察到人类胸腺组织有突触体素、S-100蛋白和NSE免疫反应神经纤维的分布，其结果与Felten等报道的结果基本一致。同时还显示胸腺组织同有突触体素、S-100蛋白和NSE免疫反应细胞。由于突触体素和NSE是神经源性标志物［11］这些细胞可能为胸腺组织内的神经内分泌样细胞，是上皮样细胞还是交错突细胞，还有待进一步研究证实。上述观察结果提示胸腺组织内除有突触体素、S-100蛋白、NSE免疫反应神经支配外，还可能有神经内分泌样细胞，为胸腺的神经内分泌免疫相互作用提供了形态学资料。
胸腺脂肪组织内尚未查见免疫反应神经纤维和免疫反应细胞，胸腺萎缩时，淋巴细胞的减少和脂肪组织的增多总是伴有神经纤维分布的缺失［4］这是否因神经内分泌对胸腺淋巴细胞的作用，而导致胸腺萎缩，还有待深入研究。
