【摘要】目的探讨胰岛A细胞参与溃疡自愈调节的可能途径。方法应用形态计量、放射免疫测定及透射电镜方法，研究大鼠实验性胃溃疡自愈期间胰岛A细胞的面数密度、超微结构及血清胰高血糖素的变化。结果与正常组及盐水组比较，A细胞面数密度于溃疡后6d、10d明显增加(P＜0.01)。溃疡后14d开始呈减小趋势，28d基本恢复正常。A细胞超微结构变化在溃疡后第6～14d较明显，主要表现为：(1)细胞核增大，异染色质减少，核周隙扩张；(2)部分A细胞粗面内质网增多，有的呈板层状排列，有的扩张成囊泡；(3)部分A细胞内分泌颗粒增多，大小不等，密度不一。血浆胰高血糖素水平从溃疡后14d到21d呈增高趋势(P＜0.01)，28d时接近正常。结论胰岛A细胞的形态和功能变化表明，它通过增加其细胞数目及增强其合成与分泌胰高血糖素的功能，积极参与了胃溃疡自愈的调节过程。

THE CHANGES OF STRUCTURE AND FUNCTION OF

ISLET A CELLS DURING THE HEALING PROCESS

OF GASTRIC ULCER IN RATS

Huang Yan^Δ Liang Wenmei^* Shi Airong^**

(Department of Histology and Embryology,Weifang Medical College,Weifang ;

^*Guiyang Medical College,Guiyang; ^**Beijing Medical University,Beijing 100083)

【Abstract】Objective To explore the possible way by which the islet A cells take part in the regulation of the healing process of gastric ulcer in rats.Methods Using morphometry,electron microscopy and radioimmunoassay to study the changes the numerical density on area(N_A) and ultrastructure of islet A cells and the level of glucagon during the healing process of gastric ulcer in rats.Results As compared with normal control group(NCG) and saline control group(SCG),the N_A of A cells markedly increased(P＜0.01) during 6-10 days in experimental gastric ulcer group(EUG),then declined on the 14th day and recovered on the 28th day;the obvious ultrastructure changes occurred in A cells during 6-14 days after inducing gastric ulcer .The changes include that the nucleus was larger and rounder with the more euchromatin and dilated perinuclear space, the rough endoplasmic reticulum increased in the number or dilated into vacuole in some A cells; the number of secrete granules increased with different size and density.The level of plasma glucagon elevated remarkedbly(P＜0.01)during 14-21 days,and recovered on the 28th day.Conclusion The above mentioned findings proved that the islet A cells were involved in the regulation of ulcer healing process by increasing their number and enhancing their functions of synthesizing and secreting glucagon.

【Key words】 Islet A cell; Morphometry; Ultrastructure; Glucagon; Experimental gastric ulcer; Rat

胰高血糖素能预防阿司匹林等引起的胃粘膜损伤早已有实验证明^［1］。在大鼠实验性胃溃疡自愈过程中，胰岛A细胞多种酶活性增强，说明A细胞代谢活跃，可能与溃疡的修复愈合有关^［2］。本实验在已有工作的基础上，对大鼠实验性胃溃疡自愈期间胰岛A细胞进行了形态计量、超微结构观察及胰高血糖素放射免疫测定，以期将形态与功能结合，进一步探讨胰岛A细胞参与溃疡自愈调节的可能途径。

材料和方法

成年雄性Wistar大鼠120只，体重180～210g，随机分为实验性胃溃疡组(溃疡组，60只)、盐水对照组(盐水组，48只)和正常对照组(正常组，12只)。大鼠实验性胃溃疡模型按本室已建立的方法^［3］制作。盐水组为模拟手术，注射等量生理盐水代替冰醋酸。正常组不作任何处理。分别进行以下实验：

1. 胰岛A细胞的形态计量

1.1免疫组织化学PAP法：分别于胃溃疡模型术后第6、10、14、21和28d取大鼠胰尾，Bouin液固定，常规石蜡包埋，制成6μm厚的连续切片，将同一时间点溃疡组、盐水组及正常组各6只大鼠胰尾相同序号的切片裱于同一张载片上。从溃疡组及盐水组各时间点和正常组胰腺切片中每例取片，隔20片取1片，按Sternberger PAP法进行免疫组织化学染色。主要步骤为：切片常规脱蜡到水，甲醇-H₂O₂封闭，依次滴加兔抗胰高血糖素抗血清(1∶2000 Watpa公司，新西兰)，羊抗兔IgG(1∶50)及PAP(1∶100)，DAB-H₂O₂液显色，Mayer苏木精复染。PBS代替胰高血糖素抗血清作为方法对照。

1.2细胞计数方法：按体视学要求取样，从每个动物的胰腺切片中选直径100μm以上的胰岛9个，每张切片取3个在×400的放大倍数下用点测量法计数目镜测试方格内胰岛落点数(P_I)及所测胰岛内胰高血糖素免疫染色细胞(A细胞)数(N_X)。用下列公式计算A细胞面数密度(N_A)，所得数据经t检验处理。

a，为一个测试点所代表的测试格面积。

2. A细胞超微结构观察

从溃疡组和盐水组术后第6、10、14、21和28d各时间点和正常组分别取3个大鼠的胰腺，按常规制备电镜标本和观察。

3. 胰高血糖素放射免疫测定

溃疡组和盐水组术后第4、6、10、14、21和28d大鼠(溃疡组10只/时间点，盐水组8只/时间点)和正常组大鼠(12只)禁食24h后，用3%戊巴比妥钠经腹腔注射麻醉并经心脏取血。用北京海科锐生物技术中心研制的胰高血糖素放射免疫测定盒并按其说明书对血浆胰高血糖素进行放射免疫测定。取血2ml，加入盛有100μl抑肽酶1 000kIU和0.5mol/L EDTA-Na的试管内，轻轻摇匀，离心分离血浆。然后依次向放射免疫测定管中加入血浆100μl，抑肽酶50μl，胰高血糖素抗血清100μl,¹²⁵I-胰高血糖素100μl，震荡混匀，4℃保温24h。之后加入免疫沉淀剂500μl，震荡混匀静置15min，2 000g离心15min，弃上清，用1470WIZARD^TM自动γ计数仪得出样品的胰高血糖素浓度ng/L，所得数据用t检验处理。

结果

1. A细胞的形态及形态计量

A细胞位于胰岛周边，胞质呈棕黄色，形状不规则，呈三角形、多边形及梭形并常有突起(图1)。外分泌部亦有分布于腺泡上皮和导管上皮细胞之间的免疫染色细胞，但数目较少。在溃疡自愈期间，胰岛A细胞自溃疡后6d始明显增加，持续至溃疡后21d(图2，3)。溃疡后10d及14d，外分泌部可见散在于腺泡之间及导管周围的胰高血糖素免疫染色细胞团，尤以溃疡后14d最明显(图4)。其他时间点及正常组则未发现。

方法对照片均为阴性反应。

在溃疡自愈过程中，A细胞N_A变化见图5。溃疡后6d和10d A细胞N_A明显增高，与正常组及盐水组比较有显著性差异(P＜0.01)，溃疡后14d呈减小趋势，28d时基本恢复正常。

图5A细胞面数密度的变化与正常组比较，P＜0.05，P＜0.01

Fig.5 The Changes of numerical density on area of islet A cells. *P＜0.05, **P＜0.01,as compared with NCG

2. A细胞的超微结构变化

溃疡组在溃疡第6d，部分A细胞胞核增大，异染色质减少，核仁明显、边集，核周隙扩张。胞质内出现较多的圆形及不规则形囊泡，囊泡有明显的膜，膜的表面有核糖体附着，囊泡内可见致密物。分泌颗粒较少，线粒体轻微肿胀，高尔基复合体未见明显变化(图6、7)。部分A细胞上述变化程度较轻，但核周隙扩张较明显，细胞基质密度较高(图8)，粗面内质网、线粒体增多并呈区域性分布，高尔基复合体较发达，分泌颗粒较多，部分分泌颗粒的致密芯电子密度较低。溃汤第10d，A细胞的超微结构变化与第6d相似，但未见明显的核周隙扩张及囊泡(图6)。溃疡第14d，A细胞的超微结构变化多样，有的A细胞分泌颗粒明显增多，细胞器未见明显变化；有的A细胞高尔基复合体发达，由多层扁平囊及大小泡组成，丰富的粗面内质网在胞核的一侧呈板层状排列，分泌颗粒大小不等(图9)；还有的A细胞核质比增大，染色质呈细粒状散在于胞核内，分泌颗粒较少，粗面内质网较丰富(图9)。溃疡第28d，A细胞的超微结构基本恢复正常。

3. 胰高血糖素放射免疫测定

如图10所示，溃疡组胰高血糖素水平从溃疡后6d到21d呈增高趋势，各时间点与正常组及盐水组比较均有极显著性差异(P＜0.01)，28d时接近正常。