一、材料和方法
1.材料和染液:类癌组织经10%福马林固定,常规包埋,切片厚4μm。染液配方:(1)缓冲硝酸银:1%硝酸银水溶液5 ml(原法为3 ml),0.2 mol/L醋酸缓冲液10 ml pH 5.6,蒸馏水85 ml(原法为87 ml)。(2)还原液:1,4对苯二酚1 g,无水亚硫酸钠2.5 g,蒸馏水100 ml。以上两液均需要临用前配制。
2.操作步骤:嗜银反应染色法[1,2](根据Grimelius,1968年)操作如下:(1)切片脱蜡至水,蒸馏水洗。(2)放入预热的缓冲硝酸银液3小时,60℃。(3)蒸馏水速洗。(4)入还原液内1分钟,45℃。(5)蒸馏水洗,镜下观察。(6)5%硫代硫酸钠液1分钟。(7)流水冲洗10分钟。(8)95%及无水酒精脱水,二甲苯透明,树胶封固。
二、结果和讨论
嗜银颗粒为棕黑色颗粒[1,2](附图)。本法应用的组织必须新鲜,及时用甲醛或含甲醛固定液固定,含酒精者不用[2]。切片脱蜡水洗时在酒精中停留时间宜短。对苯二酚对银盐的还原十分缓慢,且受温度影响较大,故从配液开始,就必须严格掌握溶剂的温度在35~55℃范围内,最佳为45℃。若嗜银反应不足,颗粒为灰黄色,可在还原后用5%硫代硫酸钠处理10分钟,水洗充分后,重新放入银液内浸10分钟(室温下,随后于45℃还原1分钟)。反应过度时颗粒为黑色颗粒。
附图胃类癌细胞浆内阳性细胞呈黑色Grimelius×400
参考文献
1刘介眉,严庆汉,路英杰等编著.病理组织染色的理论方法和应用.北京:人民卫生出版社,1983.194-219.
2凌启波编著.实用病理特殊染色和组化技术.广州:广东高等教育出版社,1989.137-142.
(收稿:1997-04-15修回:1997-11-26)
