第四军医大学学报2000年第21卷第2期

白建伟惠延年李学荣

摘要: 目的探讨视网膜下新生血管（SRNV）的发病机制及发生、发展特点.方法用高强度氩激光光凝兔视网膜，光、电镜观察视网膜、脉络膜组织病理及超微结构改变.结果光凝后1～3 d，光镜下光斑区Bruch膜及视网膜色素上皮（RPE）层断裂，组织水肿、出血、毛细血管闭塞.电镜下光感受器细胞内、外节溶解，白细胞浸润，巨噬细胞聚集.光凝后1 wk，新生血管长入光斑.结论高强度激光所造成的视网膜外层及脉络膜的破坏、局部缺血、炎性反应、出血等，在SRNV的发病机制中具有重要作用.

关键词：新生血管；激光光凝术；病理组织学；超微结构

0引言

视网膜下新生血管（subretinal neovascularization, SRNV），又称脉络膜新生血管（choroidal neovascularization, CNV）是很多后极部眼底病的显著特征^［1,2］.许多学者认为，光凝疗法是治疗眼底新生血管唯一有效的方法.而光凝疗法本身又可引起SRNV^［3,4］.目前，国内仅限于部分临床研究，对SRNV的病因、病理所知有限，对其发生、发展的特点及光凝治疗的一些规律尚在认识中.我们采用高能量氩激光光凝兔视网膜诱发SRNV，对其发生、发展过程进行了组织病理及超微结构观察，有关方面的研究国内尚未见报道.

1材料和方法

1.1材料动物模型用健康灰色家兔10只，体质量2.5～3 kg，雌雄兼用. 用氯胺酮（50 mg^．kg^-1），异丙嗪（25 mg^．kg^-1）im麻醉，5 mL^．L^-1托品酰胺及10 mL^．L^-1新福林散瞳，5 mL^．L^-1的卡因点眼后安放三面镜，用美国HGM公司产Compac型激光机的氩蓝绿激光（波长488.0～514.5 nm）作视网膜光凝. 部位在视乳头及髓线下方约8～10 PD，激光功率0.9 w及0.7 W（左右眼随机决定激光用量），曝光时间0.1 s，光斑直径50μm. 每眼共作20个光凝斑，每光斑间距300 μm.

1.2方法分别于光凝后1,3 d，1,2,3,4,6 wk及3,4 mo处死动物，摘除眼球，去除眼前节，将眼后节组织置入30 mL^．L^-1戊二醛中固定24 h，切取光凝部位的眼组织，分成1 mm×3 mm的条块，继续固定24 h，再放入0.1 mol^．L^-1磷酸缓冲液中浸洗30 min，10 mL^．L^-1锇酸后固定1 h，乙醇、丙酮逐级脱水，环氧树脂812浸透包埋、聚合、切片厚1μm，经美蓝及碱性复红染色后作光学显微镜检查.用同一定位好的标本块作超薄切片，醋酸铀及枸橼酸铅染色后作透射电镜检查并照像.

2结果

2.1光学显微镜观察光凝后1 d，光斑区Bruch膜及视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium, RPE）层断裂，组织水肿、出血.脉络膜毛细血管闭塞、大血管破裂（Fig 1）. 3 d时，RPE细胞肿胀、破损.1 wk时，水肿消退，RPE细胞呈层状增殖. 1～6 wk，光斑区见CNV，大部分位于光斑边缘（Fig2,3）. 光凝后3～4 mo，胶原纤维增生长入光斑.

图 1光凝后1 d,光斑区Bruch膜(B)及视网膜色素上皮层(R)断裂，视网膜、脉络膜组织严重破损、水肿、出血，毛细血管闭塞.

fig 1One day after photocoagulation, disruption of

the Bruch membrane and RPE, Severe damage to the retina

and choroid tissue, edema, hemorrhage, closing up of

choroidal capillaries under light microscope×400

图 2光凝后1 wk，光斑边缘视网膜下腔见新生血管(NV)

fig 2One week after photocoagulation, neovascularization (NV)

in subretinal space at spots edge×400

图 3光凝后4 wk，光斑边缘视网膜下腔内见新生血管(NV)，周围有RPE增殖

fig 3Four weeks after of photocoagulation, neovascularization (NV)

in subretinal space at spots edge. surrouned by RPE eclls (R) of hyperplasia

2.2透射电镜观察光凝后1 d，光斑区光感受器细胞内、外节溶解，白细胞浸润、巨噬细胞聚集（Fig4），内、外核层及RPE细胞核凝固坏死. 3 d时，光斑边缘RPE细胞内线粒体大量空泡变性.光凝后1 wk，光斑边缘脉络膜毛细血管增生，沿断裂的Bruch膜长入光斑（Fig5）. 光斑中心区仍见巨噬细胞. 光凝后2 wk，光斑中心基底部见新生血管.3 wk时，视网膜下腔有内皮细胞增生. 周围有RPE细胞增殖包绕（Fig6）. 光凝后4 wk，光斑边缘视网膜下腔见大量新生血管.在另一些标本中，视网膜下腔有新生血管，附近可见周细胞（Fig7）. 2 mo时，光斑边缘仍见脉络膜毛细血管增生长入光斑. 3～4 mo，光斑区见大量胶原纤维. （0.9 W及0.7 W激光功率,光凝后眼底改变及病理检查结果基本相同，无统计学差异^［4］，以下不再分述）.

图 4光凝后1 d,光斑区光感受器细胞内、外节溶解，周围有白细胞浸润（箭头），巨噬细胞聚集(M)

fig 4One day after photocoagulation, photoreceptor cells dissolved,

with leukocytes (arrow) & macrophages infiltration(M)×2500

图 5光凝后1 wk,光斑边缘脉络膜毛细血管增生，沿断裂的Bruch膜(B)

长入光斑. RPE细胞(R)增殖呈纺锤形.箭头示脉络膜毛细血管基底膜

fig 5One week after photocoagulation, the hyperplasia of

choroidal capillaries at spots edge into spots along the

disrupted Bruch membrane. RPE cells hyperplasia in spindles shape.

choroidal capillaries basilar membrane (arrow)×7500

图 6光凝后3 wk，光斑边缘视网膜下腔有内皮细胞(E)增生，部分管腔(L)形成，周围有RPE细胞(R)增殖. 箭头示基底膜

fig 6Three weeks after photocoagulation, endothelial cells (E)

hyperplasia in subretinal space at laser burns site, formed partly

vascular lacuna(L), neovascularization surrouned by RPE cells (R)

of hyperplasia. Basilar membrane (arrow)×2500

图 7光凝后4 wk,光斑边缘视网膜下腔内见新生血管(NV)，附近可见周细胞(P) 箭头示Bruch膜

fig 7Four weeks after photocoagulation, neovascularization (NV)

in subretinal space at spots edge. Near by

the perithelial cells(P). Bruch membrane(B)×2500

3讨论

本结果显示，光凝后视网膜、脉络膜有严重破损，视网膜外层尤为显著.脉络膜毛细血管几乎全部闭塞. 光凝后1 wk，光、电镜观察亦表明有脉络膜毛细血管增生，长入光斑边缘.3～4 wk时，视网膜下腔已有大量新生血管形成.以上观察结果提示,高强度激光所造成的Bruch膜破裂，视网膜外层、RPE损伤，出血、炎性反应，以及脉络膜缺血等改变，在SRNV的发病过程中具有重要作用. itagaki等^［5-7］报告猴眼CNV常于光凝后2～4 wk形成，本实验兔眼CNV的发生时间为1 wk. 猴眼虽有类似人眼的有利因素，但不易获得，且CNV形成时间长是一个缺点，有关氩激光诱发兔SRNV动物模型方面的文献国外尚少见报道,国内未见报道.

近年来的研究认为，高强度激光（0.6～0.9)W，小