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利用基因重组技术和由加拿大Manitoba大学Eva Turley实验室克隆的1.8kb 小鼠野生型和2.1kb突变型RHAMM cDNA序列，分别构建了可被异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达的pGEX- 2T/RHAMMw和pGEX-2T/RHAMMm质粒。按常规方法，用构建的质粒转化大肠杆菌并筛选、克隆和扩大培养转化菌株。经检测，IPTG对大肠杆菌内外源基因的最佳诱导时间为处理后第2小时。 在此基础上， 大规模培养转化细菌， 诱导进而纯化出足量的RHAMMw或RHAMMm融合蛋白。以这2种融合蛋白为抗原，分别免疫家兔，制备抗血清，用靶抗原亲和纯化血清内特异性抗体并将抗RHAMMw和抗RHAMMm抗体命名为HARw和HARm。由于人和小鼠RHAMM基因及其转录物有高度同源性，故使用这2种抗血清对正常人皮肤以及人正常和癌变胃粘膜做免疫组织化学染色。结果显示，RHAMMw和RHAMMm蛋白在皮肤内均有表达，前者在约10％的正常胃粘膜中呈弱阳性或阳性，而胃癌组织中RHAMMw阴性，但 RHAMMm 呈阳性或强阳性。HARw和HARm抗体的稀释倍数在1∶200和1∶250时，染色的效果最佳。Western 印记杂交则清晰显示，RHAMM基因在正常和癌变胃粘膜组织间有差异表达，RHAMMm蛋白相对分子质量为3.9×104，而RHAMMw的相对分子质量为5.7×104。本文结果为深入探讨透明质酸受体RHAMM与包括癌症在内的人类疾病关系的研究奠定了实验基础。
本课题受国家自然科学基金国际合作项目（39610130419 ）和辽宁省科委优秀青年科技人才基金资助（963010）
（收稿：1998-02-05修回：1998-10-15）
