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根据已发表的人TNFR膜外区基因序列设计合成一对引物，两端分别引入 XbalⅠ酶切位点，以含人TNFR-p55全长cDNA的pUC-19质粒为模板，扩增出516bp 的膜外区cDNA。基因扩增片段与表达载体pGEX-KG经XbalⅠ酶切、连接、转化大肠杆菌JM101，构成新的重组子pGK-sTNFR。重组质粒经XbalⅠ，TaqI酶切鉴定及采用双脱氧链终止法对sTNFR进行DNA序列分析表明，所克隆的sTNFR基因与报道的一致（见图1）。
图1pGK-sTNFR表达质粒的酶切鉴定
D:MW marker， C:pGK-sTNFR，B:pGK-sTNFR digested with TaqⅠ，A:pGK-sTNFR digested with XbalⅠ
转化菌经IPTG诱导表达4小时，细菌裂解物进行SDS-PAGE分析， 发现在分子质量为4.3×103处出现明显GST-sTNFR融合蛋白诱导表达带，大小与预计的理论值相符，表达量占全菌总蛋白的15％左右。重组蛋白以包涵体形式存在，经溶解、变性、复性、GST-Sepherose 4B 亲和层析纯化、凝血酶裂解融合蛋白，得到 sTNFR 蛋白。Western blot 分析表明：表达产物为sTNF受体蛋白。
（收稿：1998-08-26修回：1998-10-15 ）
