摘要：目的：研究脑不对称性对细胞因子和HPA轴的影响。方法：用伸爪取食法将小鼠区分为左利、右利、双利动物，LPS分别刺激2、4 h后取血浆用ELISA法检测IL-1β、IL-6、放免法测定血浆皮质酮含量。结果：左利组血浆IL-1β高于右利组，左利、右利组IL-1β均低于双利组。左利、右利组血浆皮质酮水平低于双利组。LPS刺激后左利组IL-1β高于右利组，双利组亦高于右利组；左利、右利组血浆IL-6水平则均低于双利组。结论：脑不对称性对神经免疫内分泌网络有影响，左利者免疫紊乱发生率高可能与此有关。

分类号：R392.1

The levels of plasma IL-1β，IL-6,corticosterone of Balb/c mice with lateralization

GAO Ming-Xia

Department of Microbiology and Immunology,Shantou University Medical College, Shantou 515031

LI Kang-Sheng

Department of Microbiology and Immunology,Shantou University Medical College, Shantou 515031

DONG Jing

Department of Microbiology and Immunology,Shantou University Medical College, Shantou 515031

Abstract：Objective: To study the relationship between cytokines，HPA axis and lateralization.Methods：By using paw preference test,right-pawed ,left-pawed,ambidextrous mice model were established. ELISA kits and radioimmunoassay were used for detection of plasma levels of cytokines and corticosterone.Results:In untreated normal Balb/c mice ,left-pawed mice had a higher IL-1β level than right-pawed mice (P＜0.05),while IL-1β of ambidextrous was the highest among them; There was no difference observed between the three groups in plasma levels of IL-6; As for plasma levels of corticosterone in untreated mice, left-pawed and right-pawed mice were both lower than ambidextrous mice.In LPS treated mice, plasma levels of IL-1β were higher in left-pawed mice than in right-pawed and ambidextrous mice, and right-pawed mice was lower than ambidextrous; The plasma levels of IL-6 were lower in left-pawed and right-pawed mice than in ambidextrous(P＜0.01). The plasma levels of corticosterone were almost the same among the three groups after the injection of LPS. Conclusion: Lateralization could influence cytokine levels and HPA axis in mice.

Key words：Brain lateralizationNeuroimmunoendocrineCytokines ▲

机体在发育过程中形成了脑不对称性（Brain lateralization）。脑不对称性是一个普遍的生物学现象，对机体许多功能有明显影响。因手功能的不对称性是脑不对称性最明显的表现，研究上常按手功能不对称性的不同将人群区别为惯用左手者（左利，Left -hander，LH），惯用右手者（右利，Right-hander，RH），无明显惯用手者（双利，Ambidextrous-hander,AH）。自从80年代Geschwind报道了左利人群有较高的免疫紊乱发生率后，研究者运用伸爪取食法区分出左利和右利动物, 深入研究脑不对称性对免疫功能影响及可能的机制。正常状况下左利和右利动物T细胞、Mφ细胞、NK细胞活性不同，用LPS腹腔注射动物模拟细菌感染和炎症性疾病的情况下，左利和右利动物血浆ACTH和皮质酮（Corticosterone，CS）上升幅度亦与脑不对称性有关^［1］。神经免疫内分泌网络在免疫紊乱发病机制中起的作用，越来越受重视，IL-1、IL-6和CS是其中的重要因子。为探讨左利者免疫紊乱发生率高的原因，有必要研究脑不对称性对神经免疫内分泌网络的影响。为此，本文研究了脑不对称性Balb/c小鼠正常状况及受LPS 刺激后血浆IL-1β、IL-6和CS的水平变化。

1材料与方法

1.1实验动物Balb/c健康小鼠，雌性，4周龄，由中山医科大学实验动物中心供应。在本实验室喂养，5只/笼，自由饮水取食，每天保持12 h明暗环境，行为测试及最后的实验均在上午进行。

1.2左利和右利动物模型的建立动物适应环境1 w后经伸爪取食法区分为左利、右利和双利3组。方法如下：小鼠禁食12～18 h后，置于一特制盒内，盒子体积为4.5 cm×4.5 cm×6.0 cm，前壁中央连有一小管可供放入小饲料块，以小饲料块逗引小鼠伸爪取食，观察其50次伸爪取食中伸右爪次数，记为右利分（Right paw entry,RPE)。2 w内共测试4次，第1次作为训练，不记录，将余下3次右利分平均，0～20分为左利鼠(Left-pawed mice)，21～29分为双利鼠(Ambidextrous mice)，30～50分为右利鼠(Right-pawed mice)^［2］。区分后1 w，实验组每只小鼠以LPS(Escherichia coli serotype 026:B6, Sigma) 5 μg/ 0.5 ml无菌生理盐水，正常对照组用0.5 ml无菌生理盐水（NS），腹腔注射。注射后2 h和4 h分别快速断头杀鼠。用置于冰上并肝素化的试管收集小鼠血液，3 000 r/min离心15 min后取血浆，分装后置于－30℃保存待测。

1.3血浆IL-1β和IL-6检测用ELISA法检测，使用由深圳晶美公司提供的ENDONGEN公司生产的小鼠IL-1β、IL-6 ELISA试剂盒。按说明书使用，A值用SPSS软件绘出标准曲线，计算各样本的值。

1.4血浆CS检测肝素抗凝血浆10 μl加无水乙醇240 μl 于Eppendorf管，振荡混旋10 s，10 000 r/min 离心10 min，取上清50 μl入一小玻璃试管，每个样品设2管，40℃，15 min真空离心干燥，即为制备的样品管。同时设已知CS含量的质控管，用³H-CS、CS结合蛋白进行放免测定。

1.5统计方法用SPSS和EXCEL软件对各组血浆IL-1β、IL-6、CS水平进行单因素方差分析（ANOVA）。

2结果

2.1Balb/c 小鼠脑不对称性分布模式（图1） 左利小鼠28只（RPE在0～20之间），右利小鼠30只（RPE在30～50之间），双利小鼠18只（RPE在21～29之间）。左利小鼠的RPE主要在15～20间,右利小鼠的RPE在35～40间。

图1Balb/c雌性小鼠RPE(Right paw entry)分布

Fig.1Distribution of paw preference in the population of Balb/c female mice.Paw preference is represented as the RPE score

2.2正常对照组血浆IL-1β和IL-6水平未注射LPS的正常对照组血浆IL-1β水平测定结果表明（图2），左利组显著高于右利组(P＜0.05)，双利组显著高于左利、右利组(P＜0.05)。其血浆IL-1β水平依次为双利组＞左利组＞右利组。血浆IL-6 如图3所示，正常对照各组之间血浆IL-6水平依次为右利＞双利＞左利，但均无统计学意义。

图2脑不对称Balb/c小鼠血浆IL-1β水平

Fig.2Plasma levels of IL-1β in right-pawed,left-pawed and ambidextrous Balb/c mice

2.3LPS注射后血浆IL-1β和IL-6水平变化血浆IL-1β 如图2所示，LPS刺激后2 h，左利组显著高于右利组（P＜0.05），双利组亦显著高于右利组（P＜0.05），左利与双利组间无明显差异；刺激后4 h，左利组和双利组仍然显著高于右利组（P＜0.05）。左利组LPS刺激4 h后较2 h有所上升，而右利组和双利组IL-1β均较2 h组下降。LPS刺激后，左利组上升幅度最大，约为5倍(2 h)和7倍(4 h)，右利组次之，约2.4倍(2 h)和2.0倍(4 h)，双利组约1.5倍(2 h)和1.8倍(2 h)。由此可认为左利组对LPS刺激引起的IL-1β上升最敏感。血浆IL-6水平如图3所示，LPS刺激后2 h，左利组上升幅度约为6倍，右利组上升幅度约为7倍，双利组升高了约18倍，显著高于左利组和右利组(P＜0.01)， 双利组对LPS刺激引起的IL-6上升最敏感。LPS刺激后4 h，左利、右利和双利3组间IL-6无明显差异。与LPS刺激后2 h相比，左利、右利和双利3组IL-6在刺激后4 h均显著下降（P＜0.05）。

图3脑不对称Balb/c小鼠血浆IL-6水平

Fig.3Plasma levels of IL-6 in right-pawed,left-pawed and ambidextrous Balb/c mice

2.4LPS注射后血浆CS水平变化见图4，未注射LPS正常对照双利组血浆CS水平显著高于左利和右利组（P＜0.05），左利组血浆CS水平亦高于右利组，但两组间差别无统计学意义。LPS刺激2 h后，左利、右利和双利3组血浆CS水平均明显升高(P＜0.05),但3组间血浆CS水平无明显差别。