摘要目的：探讨NKA-I细胞在大鼠消化道的发生、发育规律及其与功能的关系。方法：应用免疫细胞化学PAP法，观察了胚胎13 d至生后90 d及成年大鼠消化道内NKA-I细胞发生及发育的变化。结果：NKA-I细胞首先见于胚胎14 d的十二指肠粘膜，早于空肠(胚胎16 d)和回肠(胚胎17 d)，其阳性反应强度及细胞数量随发育而增加，30 d时与成年鼠相似；结肠粘膜内于胚胎17 d见多个细胞，但此后数量较少直至成年；胃粘膜于胚胎15 d见个别细胞外，以后无明显变化；食道壁始终未见阳性细胞。结论：推测该细胞为分泌NKA的肠道内分泌细胞；表明同一种神经肽内分泌细胞在消化道不同节段其发生不同步，且具有不同的发育规律，并与消化活动有密切的关系。

中国图书分类号R329.1

A study on the occurance and development of the neurokinin A

immunoreactive cell in rat digestive tract

LI Li-Yan, GUO Jian-Hui, CAI Wen-Qin et al.Kunming Medical College Kunming 650031

AbstractObjective: Research the occurance and development of the NKA-I cells in rat digestive tract and their relationship with its function.Methods: Adapting the immunocytochemical PAP, Systematically we observed the occurance and development of the neurokinin A immunoreactive (NKA-I) cells in rat digestive tract from the 13th day of fetus to 90th day after birth and adult ras.Results: NKA-I cells was first found in the duodenum mucose on the 14th day of fetus, earlier than in the jejunum ( 16th day ) and ileum ( 17th day ), and its Positive reaction and the number of cells increased with further development, after birth the 30th day, it became quite identical to that of adult rat; NKA-I cells were seen in the colon mucosa on the 17th day of fetus, later on the number kept decreasing till grown up stage; No change was observed in the stomach mucosa except that few cells showed up on the 15th day of fetus; No positive cell was found on the oesphagus wall.Concluslon: we could judge it is endocrine cell which produces NKA. In conclusion, a same sort of neuropeptide endocrine cells at different sectionsof digestive tract do not occur spontaneously with defferential developments which are closely related to the digestive activities.

Key wordsNeurokinin ADigestive tractRatImmunocytochemistry

神经激肽A(neurokinin A, NKA)是近年来发现的一种新的速激肽，参与多种功能的调节，被认为是肽类神经递质^［1］。有关大鼠消化道NKA发育的研究报道较少，Flatt等观察到胚胎14 d至生后35 d，胃内NKA含量的增加与胃重量的增加呈平行关系^［2］。但有关消化道NKA免疫反应(NKA-immunoreactivity, NKA-I)细胞的发生及发育研究尚未见报道，本文应用免疫细胞化学PAP法，系统地观察了NKA-I细胞在消化道各段的出现时间、部位和其形态改变以及数量变化等，探讨其发生发育的规律以及与功能的关系，期望为消化系统的生理和病理生理学研究提供新的形态学资料。

1材料与方法

1.1实验动物用体重250～300 g的Wistar系大鼠，每晚6时雌雄以3∶1比例合笼，次晨8时检查阴栓，以查到阴栓日为妊娠0 d。分别取妊娠13～21 d的胎鼠，生后1、3、5、10、15、20、30、60、90 d的幼鼠及成年鼠(每组8例)的食道中段、胃体部、十二指肠上段、空肠中段、回肠末段及横结肠中段行恒冷箱冰冻切片，厚20 μm。

1.2免疫细胞化学PAP法按文献［3］进行。其中抗体的工作效价为兔抗NKA 1∶5 000(来源于Peninsula Lab.INC)，羊抗兔血清1∶20，PAP复合物1∶200(购于上海第二军医大学生理室)。

1.3特异性对照实验①吸收实验及替代实验，结果均为阴性。②以成年大鼠空肠标本同时行PAP染色，作阳性对照。

2结果

2.1NKA-I细胞的发生及分布NKA-I细胞最早见于肠道上皮内。在十二指肠、空肠、回肠和结肠分别见于胚胎14、16、17 d的肠上皮内。在胚胎18 d(十二指肠、空肠)和19 d(回肠)小肠绒毛形成时，于绒毛上皮细胞间可见(图1a、b)，肠腺出现时亦随之出现于腺上皮内。生后10～15 d前主要分布于小肠腺上皮，出生20 d后随其数量的增加，在小肠腺及绒毛上皮内均有分布。亦有少数细胞分布于小肠固有膜内。30 d时与成年鼠的相似。但在结肠，出生后细胞主要分布于大肠腺。在胃则于胚胎15 d偶见于胃上皮内，胃底腺形成后则仅分布于胃腺上皮。在食道，至成年始终未见阳性细胞。

2.2NKA-I细胞的数量及阳性反应强度变化在小肠，细胞出现时均为孤立地，极少数地，着色浅，阳性很弱，随肠腔继发腔的出现其数量及阳性反应强度增加明显，特别是在绒毛形成时更为显著(图1a、b)，肠腺出现时，腺上皮内的阳性细胞亦随之增加。但在出生前后，细胞数量减少，特别是生后10～15 d前，细胞着色较浅，颗粒亦减少。出生20 d后其着色深度与数量又逐渐升高，30 d后与成年鼠的相似(图 1c)。

胚胎17 d，结肠上皮内出现阳性细胞时即可见多个阳性较强，颗粒明显的细胞(图1d)，此后数量较少，胚胎21 d随大肠腺的出现略有增加，但出生至成年均远较小肠的少。

胃粘膜于胚胎15 d偶见个别NKA-I阳性细胞，至生后60 d数量无明显变化，且阳性较弱，90 d至成年的标本中略有增加，阳性较强(图1 e、f)。

2.3NKA-I细胞的形态变化在小肠，NKA-I细胞出现时呈棒状，着色很浅，颗粒不明显。随胚胎的发育，细胞形态亦多样化，特别是在绒毛形成时，可呈烧瓶状，纺锤形等(图1a、b)，已能见到成年时的各种形态，细胞的体积均较周围的上皮细胞大，基底部着色深，可见棕色颗粒，核较大，近基底部，为一椭圆形的浅染区。在十二指肠和回肠，常见一种基底部向邻近细胞或固有膜内发出突起的细胞，突起内均有较多的棕色颗粒，有的突起细长，有的突起呈新月状包拥其他细胞(图1c、g、h)，有的突起附近还有散在颗粒(图1i)。在胚胎期的十二指肠和结肠，尚见一种胞体狭长，两端较宽的细胞，其基底部着色更深(图1a、d↑)，但出生后结肠内多以烧瓶状细胞多见。胚胎期多数细胞的顶端不能伸达肠腔和腺腔，但出生后则绝大多数都能抵达腔面。胃粘膜层的细胞多呈椭圆形、矮锥体形，出生前后变化不大(图1e、f)。

图1大鼠消化道内的NKA-I细胞

Fig.1The Nhe NKA-I cells in rat digestive tract

3讨论

3.1NKA-I细胞的发生发育NKA-I细胞在消化道的发生时间与肌间丛内NKA的发生同步或稍晚，但较其发育迅速，细胞的阳性反应强度及细胞的数量均较同期的NKA-I阳性纤维增加明显^［4］。小肠的NKA-I细胞明显多于结肠，在胃则偶见，这与人胎儿5-HT免疫活性细胞的发生相似^［5］。但在食道却始终未见阳性细胞，此与人胚胎亲银细胞的发生有相似之处^［6］。

大鼠小肠胚胎期NKA-I细胞的数量及阳性反应随胚胎的发育特别是绒毛的出现而逐渐增多与增强，可能与适应绒毛的生长及功能活动有关。出生前后及生后20 d的变化与小鼠十二指肠嗜银细胞生后4 w末数量接近成年水平^［7］。且NKA-I细胞在绒毛上皮及腺上皮内均有分布，此与大鼠和小鼠嗜银细胞大多数集中于肠腺有所不同。上述该细胞这种数量的显著变化，与其它细胞的发育有相似之处，如Singh在研究人胚胃肠道嗜铬细胞时报道，在顶臀长140 mm(约17 w)时期，细胞数量达高峰，此后逐渐减少^［9］。人胚胎期胃肠道内分泌细胞的变化与Singh的相近^{［5，6，10］}。我们认为，NKA-I细胞的这种变化如亲银细胞在胚胎其数量的变化一样^［6，7］，可能表明其在胚胎发育过程中负有重要的生理功能。结肠内的变化亦如此。NKA参与多种胃肠功能的调节^［1］，如胃肠运动、粘膜离子转运、血液动力学、消化酶的分泌及神经的兴奋性等。消化管的发育要经历一个急剧生长、扭转和盘曲阶段，直至十二指肠、升、降结肠粘贴于腹腔后壁后，才具有成年的固定位置，可以想象，在此以前必须加强运动，才能完成扭转盘曲的动作。这段时间NKA-I细胞数量上的不断增加，可能与这一生理功能有关，而出生前后所谓的“减少”，可能是由于颗粒全部释放排出所致，可能和机体为适应生后吮乳、断乳对消化道功能的调节有关。

胃肠内分泌细胞主要存在于胃肠粘膜上皮及腺上皮细胞之间，但我们在大鼠小肠固有层结缔组织内，观察到了NKA-I阳性细胞，其细胞形态特征，颗粒染色特点等与上皮细胞之间的NKA-I细胞类似，因此我们认为这些细胞可能也是NKA-I内分泌细胞。有作者观察到4～5个月人胚肠<