中国图书分类号R392.11

基因工程干扰素是一类具有抗病素、抗肿瘤和免疫调节作用的细胞因子，被广泛地应用于临床治疗中。根据《中国生物制品规程》基因工程干扰素半成品中残余宿主菌蛋白含量小于总蛋白量的2的要求，我们建立了酶标法用于该项目的检定^［1，2］。

1材料与方法

1.1包被抗体(羊抗宿主菌蛋白IgG血清)和夹层抗体(兔抗宿主菌蛋白IgG血清)由本室制备^［3］。

1.2酶标抗体(羊抗兔)辣根过氧化物酶(HRP)-羊抗兔IgG，购于华美生物工程公司。

1.3宿主菌蛋白标准本室制备的大肠菌JM103可溶性蛋白。

1.4测定方法采用双夹心酶标法。

2结果

2.1线性工作曲线的确定在实验过程中，我们发现抗原抗体反应在37℃，40 min比较合适，如图1所示，标准蛋白在10～50 ng/ml之间与其OD值呈良好线性关系(F检验，P＜0.01)。从而保证了检测结果的可靠性和重复性。

图1不同浓度宿主菌可溶性蛋白OD值曲线

Fig.1 Curve of OD values of different concentrations of E.coli proteins

2.2rIFN-α2b半成品中残余宿主菌蛋白含量的测取rIFN-α2b 3批半成品9605、9606和9607均稀释为蛋白含量为100μg/ml，按照《中国生物制品规程》要求rIFN-α2b半成品中残余宿主菌蛋白含量小于总蛋白量的2。即上述3批半成品每剂量(10 μg/ml)残余宿主菌蛋白含量要小于20ng/ml，测定结果分别为11.5、16.3、14.2ng/ml，均符合要求。

2.3准确性试验在同一次测定中，我们将样品9606稀释成4个稀释浓度(5、10、15、20 μg/ml)，进行测定，各稀释度测得CV值均小于8.00%，说明本方法准确性好。

2.4重复性试验取9606批半成品不同时间对其残余宿主菌蛋白测定10次，CV值为3.25%，说明本方法重复性较好。

2.5灵敏度试验将宿主菌蛋白标准作一系列稀释至0.15ng再进行测定。蛋白含量在1ng/ml时OD值仍可达0.30。至1ng/ml以下，误差较大。

3讨论

本实验采用常规的双夹心酶标法，实验步骤及注意事项均按酶标试验要求做，试验中值得注意的是宿主菌蛋白标准必须全部是可溶性的，否则测定结果就会偏大，造成不必要的损失。

总之，本方法是一种简便、快速、灵敏度高、特异性强的检定方法，同样适用于其它的基因工程产品的此项检定项目，从而保证了我们的基因工程产品的质量。

致谢：本实验承蒙郭凤云老师，潘荆华老师的指导和帮助，在此表示感谢。

作者简介：石晓丽，女，32岁，助理研究员，主要从事干扰素应用研究；

盛君，男，36岁，研究员，硕士生导师，主要从事分子生物学研究定结果

4参考文献

[1]庄晨杰，吴昊，童葵塘. 酶联免疫分析法测定人αl型基因工程干扰素成品中的干扰素蛋白含量. 病毒学报，1995；11(2)：180

[2]张振龙，高梦玲，陈晓龙 et al. 检测α肿瘤坏死因子ELISA方法的建立及初步应用. 中国生物制品学杂志，1996；9(3)：136

[3]高天祥. 临床免疫与实验技术.济南：山东科学技术出版社，1984：408-418

〔收稿1998-01-19修回1998-03-20〕