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鸡胸腺细胞特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

2022-07-29
来源:求医网
中国图书分类号R392.11

人和小鼠淋巴细胞表面抗原的各种单克隆抗体(Monoclonal antibodies,McAbs)试剂商品化应用,为细胞免疫学研究与疾病诊断提供了有力工具,而对禽类细胞免疫学研究相对落后于人和哺乳动物的研究,原因之一是缺乏淋巴细胞表面抗原的各种McAbs试剂。为此,我们研制并建立了抗鸡胸腺细胞McAbs杂交瘤细胞株,为我国禽类免疫和免疫病理研究提供了重要手段。

本实验以鸡胸腺细胞为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,完整细胞ELISA法检测并克隆阳性细胞株,共获得15株稳定分泌抗体的克隆细胞株。采用液相ELISA法测定15株McAbs与外周血T细胞、外周血B细胞、胸腺细胞、法氏囊细胞和红细胞的反应性,结果表明,其中1B6、1C5、9H6、3E4、5E10等5株McAbs只与鸡胸腺细胞和外周血T细胞反应,而

不与外周血B细胞、法氏囊细胞和红细胞反应。对这5株McAbs进行了亚类鉴定,属IgG1的有3E4和

9H6,属IgG2b的是1C5和1B6,属IgM类的是5E10。以胸腺细胞、法氏囊细胞制备膜抗原,经SDS-PAGE电泳,McAbs与膜抗原进行Western blot分析亦表明,这5株McAbs与胸腺细胞膜抗原反应出现一条反应带,分子量约为60~65 kD,而相同条件下与法氏囊细胞膜抗原反应未出现反应带。采用流式细胞术分析了这5株克隆细胞分泌的McAbs与胸腺细胞、脾细胞、法氏囊细胞及外周血单个核细胞的阳性反应率,结果表明,这5株McAbs与法氏囊细胞的阳性反应率不超过1.3%,与其他淋巴组织的阳性反应率分别为:胸腺细胞63.3%~72.4%,脾细胞17.3%~23.5%;外周血单个核细胞为23.0%~27.0%。

通过McAbs的特异性试验、组织学分布测定及Western blot分析均表明,这5株杂交瘤细胞分泌的McAbs可认为是针对鸡胸腺细胞的特异性McAbs,可作为鸡胸腺细胞的标记试剂和纯化试剂。这一工作的进一步完成,将为我国禽类免疫细胞分离、纯化、表面分化抗原以及淋巴细胞亚类鉴定提供重要的研究手段。

作者简介:李一经,男,40岁,博士,副教授,现从事兽医微生物与禽类细胞免疫学研究;曹殿军,男,32岁,博士,副研究员,现从事新城疫的分子生物学研究

〔收稿1997-09-09修回1998-03-09〕