摘要：目的构建人单链白细胞介素12（hscIL-12）融合基因并在真核细胞中进行表达，为进一步研究hscIL-12融合蛋白的生物学活性奠定基础。方法应用重组PCR技术将hIL-12p40和p35亚单位两段编码序列的cDNA通过一疏水性多肽接头（Gly₄Ser）₃碱基序列进行前后拼接（IL-12p40-多肽接头-p35），构建hscIL-12融合基因，并进行核苷酸序列测定，进一步将hscIL-12融合基因插入pcDNA3．1真核表达载体中，转染COS-7细胞表达hscIL-12融合蛋白，并行Westernblot分析。结果该融合基因经DNA序列分析表明：p40、p35、linker的连接顺序、方向及序列完全正确，融合基因可在COS-7细胞中表达hscIL-12融合蛋白。Westernblot显示该融合蛋白分子量为70000u，可与鼠抗人IL-12p40／p70单克隆抗体特异性结合。结论重组PCR技术是十分有效、可靠的体外基因重组方法。

分类号：R392．11文献标识码：A

文章编号：1000-8861（2001）01-0022-05

Construction of human single chain interleukin-12 fusion gene by recombinant PCR

ZHANG Mei（Institute of Hematology，the First Hospital of Xi’an Jiaotong University，Xi’an 710061，Chian）

SI Lu-sheng（Institute of Immunopathology，College of Basic Medical Sciences，Xi’an Jiaotong University，Xi’an 710061，China）

WANG Yi-li（Institute of Immunopathology，College of Basic Medical Sciences，Xi’an Jiaotong University，Xi’an 710061，China）

Abstract：Objective To study biological functions of single chain IL-12 protein，we constructed fusion gene of recombinant human single chain IL-12（hscIL-12） and expressed the fusion gene in mammalian cell．Methods A hydrophobic polypeptide linker （Gly₄Ser）₃ was used to splice two different gene fragments of p40 and p35 subunits of hIL-12 （hIL-12 p40-linker-p35） by recombinant PCR for constructing rhscIL-12 fusion gene in vitro．After sequencing，rhscIL-12 fusion gene was inserted into pcDNA3．1（＋） eukaryotic expressing plasmid and then transfected into COS-7 cell by lipofection．The fusion protein expressed was analysed with Western blot．Results Sequence analysis showed that the splicing order，the direction and the sequence in hscIL-12 fusion gene were completely correct．Expressed hscIL-12 fusion protein in COS-7 cells combined with mouse anti-human IL-12 monoclonal antibody specifically．Western blot showed the appearance of 70 000 u band of fusion protein．Conclusion The result indicates that recombinant PCR is a very effective and reliable method for gene recombination in vitro．

Keywords：recombinant PCR； human interleukin 12（hIL-12）； human single chain interleukin 12（hscIL-12）； fusion gene基金项目：陕西省自然科学基金资助项目（99SM49）

作者简介：张梅（1958－），女，陕西西安市人，副教授，博士，主要从事恶性血液病免疫治疗和基因治疗的相关基础及临床研究。Tel：（029）8083206参考文献：

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收稿日期：2000年9月4日

修稿日期：2000年9月18日

出版日期：2001年1月15日