［中图分类号］Q556.9［文献标识码］B

［文章编号］1000-8861（2000）05-0394-01

Determiningofplasmaa₁-ACTlevelwithrochetelectroimmunoassay

a₁-抗糜蛋白酶（a₁-ACT）是一种主要的急性期反应蛋白，在急性炎症、应激和外科手术时，它的血浆含量明显增高。本室建立了改良火箭电泳法检测人血浆a₁-ACT含量，为a₁-ACT与疾病的相关性的临床及基础研究提供一种免疫定量法。

1材料与方法

1．1血浆收集选择本院哮喘儿童90例作为哮喘组，年龄0.25～12．75岁；健康儿童180例作为对照组，年龄0.04～13.2岁；哮喘儿童采急性期及缓解期双份血浆，所有研究对象均采静脉血，用ACD液抗凝。

1．2试剂免疫人a₁-ACT抗血清及人血浆蛋白标准品购自DAKO公司；琼脂糖购自Promega公司；巴比妥钠、盐酸为国产分析纯。

1．3方法采用0.06 mol／L巴比妥钠-盐酸缓冲液（pH8．6）作为电极液，0.03 mol／L巴比妥钠-盐酸缓冲液（pH8．6），将琼脂糖配成1．3％胶，标准品血浆中a₁-ACT含量为0.3 g／L，每次实验前用生理盐水稀释成每5 μl含a₁-ACT量分别为0.25 μg、0.20 μg、0.125 μg、0.06 μg、0.03 μg、0.02 μg；被测血浆用生理盐水按1∶10稀释。26 ml胶含兔抗人a₁-ACT抗血清0.139 ml，制成胶板并打孔，每孔分别加上血浆稀释标准品及稀释的被测血浆5 μl。电泳条件为25 °C，端电压10 v／cm，电泳时间4 h。电泳完后，0.9％的生理盐水漂洗过夜，然后用0.1％的考马氏亮蓝R₂₅₀染液染色5 min，再用冰乙酸、无水醇及蒸馏水按1∶3∶6配成的脱色液脱色至背景清晰为止。根据火箭高度及标准a₁-ACT含量作标准曲线，由标准曲线求被测人血浆中a₁-ACT含量。

2结果

按本法测定180例正常儿童血浆a₁-ACT含量为0.3093±0.087 g／L；90例哮喘儿童急性期血浆a₁-ACT含量为0.5472±0.127 g／L，缓解期a₁-ACT含量为0.3174±0.118 g／L。哮喘组急性期血浆a₁-ACT含量明显高于正常儿童组（P＜0.01），且明显高于缓解期（P＜0.01）；而哮喘组缓解期血浆a₁-ACT含量与正常儿童组则无显著性差异（P＞0.05）。

3讨论

本文结果表明：哮喘急性发作期血浆a₁-ACT含量明显高于缓解期和正常儿童组；而哮喘组缓解期血浆a₁-ACT含量与正常儿童组则无显著性差异。这一现象可能与a₁-ACT属于急性相反应蛋白有关。炎症、变态反应等病理情况可刺激a₁-ACT合成；血浆a₁-ACT升高对维持体内蛋白酶与抗蛋白酶之间的平衡是重要的，并可能参与炎症反应与免疫反应的调节^［1］。因此测定血浆a₁-ACT可作为观察哮喘病情转归的一项有用指标。

火箭电泳是一种免疫学方法，应用抗原与抗体反应结合原理，直接检测血浆a₁-ACT含量，只要样本中a₁-ACT抗原性不发生改变，便可准确测定出其含量；而单向免疫扩散电泳有时间长、误差大的缺点。故火箭电泳的特点是特异性强、灵敏度高、操作简便、不易受其它非抗糜蛋白酶干扰、测定结果易作比较。所以a₁-ACT火箭免疫电泳的建立为a₁-ACT应用于临床及基础研究提供了又一种方法。

［基金项目］国家自然科学基金资助项目（39570749）

［作者简介］尹晓娟（1966－），女，湖南邵阳市人，主治医师，硕士，主要从事a₁-抗糜蛋白酶遗传缺陷在中国人发病中的作用研究。

［参考文献］

［1］尹晓娟，李为明.a₁-抗糜蛋白酶的研究进展［J］．四川医学，1999，20（3）：281～283．

［2］LAURELLC-B．Electroimmunoassay［J］．ScandJClinLabInvest，1972，124（Suppl）：21～27．

［收稿日期］1999-10-26［修稿日期］2000-04-18