［摘要］目的探讨TNFα、IL-6、IL-4、IL-2对IFNγ诱导的小鼠腹腔巨噬细胞（mouseperitonealmaerophage，MPM）抗弓形虫（toxoplasma gondii，TG）效应的机制。方法应用³H-U标记的TG在MPM内的增殖实验及¹²⁵I-UdR标记的细胞毒实验，结果和结论①高浓度TNFα只能诱导MPM轻微的抗TG效应，而与亚剌激量IFNγ结合几乎可以完全抑制TG增殖；抗TNFα在IFNγ诱导MPM的最初阶段，可消除IFNγ诱导的ΜΡΜ的抗ΤG效应，与ΙFNγ诱导ΜΡΜ产生内源性ΤΝFα的作用相同。②IL-6可促进TG在MPM内的增殖，并能逆转IFNγ诱导的MPM抗TG效应。③IL-4在体外可部分抑制TG在MPM内的增殖，其作用机制与TNFα无关，但与IFNγ有相加作用。④体外应用IL-2对MPM抗TG作用无影响；体内应用IL-2明显延长急性TG感染小鼠的生存时间（P＜0.05），治疗组小鼠脾细胞杀伤肿瘤细胞及TG感染自身细胞的能力，均明显高于对照组（P＜0.001）；而正常小鼠NK细胞及LAK细胞杀伤自身感染TG靶细胞能力，显著低于杀伤肿瘤细胞的能力（P＜0.001）；经IL-2诱导的LAK细胞杀伤自身感染TG靶细胞的能力，明显高于NK细胞（P＜0.001） ，并与LAK细胞杀伤肿瘤靶细胞的能力无明显差别（P＞0.05）。

［中图分类号］R531.8［文献标识码］A

［文章编号］1000-8861（2000）03-0196-04

Effects of TNFα，IL-6，IL-4 and IL-2 on IFNγ-induced toxoplasmastatic activity

FANG Yan-qiu

（Central Laboratory，First Teaching Hospital，Bethune University of Medical Sciences，Changchun 130021，China）

XU Shu-fen， TAN Yan

（Center of Biotherapy First Teaching Hospital，Bethune University of Medical Sciences，Changchun 130021，China）

［Abstract］Objectire To observe the effects of IL-6，IL-4，TNFα，IL-2 and IFNγ οr a combination of these cytokines and ability to restrict growth of toxoplasma gondii（TG）.MethodsMurine peritoneal macrophage（MPM）were incubated with ³H-uracil-labelled TG in vitro. Results and Conclusions TNFα alone inhibited the intracellular proliferation of TG slightly.The IFNγ-induced toxoplasmastatic adctivity was inhibited by neutralizing antibodies against mouse TNFα in a dose- and time-dependent way.Prdetreatment of unelicited MPM with IL-6 enhanced TG replication in a dose-dependent manner.Pretreastment with IFNγ resulted in active killing of parasites whereas the addition of IL-6 and IFNγ pretreatment resulted in reversal of IFNγ-mediated toxoplasmacidal activity.IL-4 alone inhibited the growth of TG in MPM only partially.No synergistic activity of IL-4 and IFNγ on tne inhibtion of TG proliferation was found in vitro，IL-2 did not induce the toxoplasmastatic activity of in MPM.However in vivo treatment of mice with IL-2 had prolonged time of survival compared with control mice after infecftion of TG.Studies on the protective mechanism demonstrated that IL-2 could significantly enhance the NK and LAK activity to kill tumor target cells and LAK activity to kill autologous sppleen cells infected with TG but not NK activity.

［Key words］toxoplasma gondii；TNFα；IL-6；IL-4；IL-2；murine peritoneal macrophage

多数研究证实，IFNγ是激活巨噬细胞（Μφ）抗TG的主要细胞因子^［1］。SUZUKI等人^［2］成功地应用抗IFNγ单抗注入TG慢性感染的小鼠体内，使之转变为致死性TG病，更进一步证明IFNγ在机体抗TG感染中的重要作用，但同时也涉及其它细胞因子，如TNFα、IL-6、IL-1、IL-4、GM-CSF、IL-2等，它们在激活Mφ及IFNγ产生方面均起着重要的调节作用。近年来国外关于上述细胞因子单独对Mφ抗TG作用的影响及对IFNγ诱导的Mφ抗TG效应的影响的报导较多（国内尚无这方面报导），但结果不尽相同。本文应用C₅₇BL／6 MPM系统地观察了TNFα、IL-6、IL-4、IL-2等相关细胞因子对IFNγ诱导MPM抗TG效应的影响，并且对其机制进行了探讨。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物及虫株：C₅₇BL／6雌性小鼠6～8WK龄，经PCR检测为TG阴性；RH株TG为常用标准强毒株；Yac-1细胞为NK敏感细胞株。

1.1.2试剂：HurIL-2、IL-6、mrIFNγ、TNFα、IL-4、兔抗小鼠TNFα，由德国MPG免疫研究所赠送；³H-U购于中国科学院上海核技术开发公司；¹²⁵I-UdR购于北京中国原子能研究所。

1.2方法

1.2.1TG增殖实验^［3］

1.2.2小鼠NK细胞杀伤活性测定^［4］

1.2.3小鼠LAK细胞活性测定^［5］

2结果

2.1TNFα在IFNγ诱导的对MPM抗TG效应中的作用IFNγ诱导的MPM对TG增长有明显的抑制作用，并呈剂量依赖关系，TNFα诱导的MPM只有在高浓度时才表现出轻微的抑制效应（见图1A）；在1000U／mlIFNγ诱导MPM抗TG作用的同时加入兔抗鼠TNFα中和抗体及兔抗鼠IL-1β（见图1B），结果表明：抗TNFα抗体对IFNγ诱导MPM抗TG效应有抑制作用，且呈剂量依赖关系，而IL-1β抗体无此作用；观察不同时间加入抗TNFα抗体（2×10⁴U／ml）对IFNγ（1000U／ml）诱导的MPM抗TG效应的影响（见图1C），IFNγ诱导MPM 6h后加入抗TNFα抗体，其抑制作用明显降低，12h后几乎不作用；在TG感染MPM前24h以不同剂量的TNFα与亚剂量IFNγ（0.1U／ml）协同诱导MPM抗TG效应时发现（见图1D），亚剂量IFNγ及高剂量TNFα对MPM抗TG效应均无明显作用，但二者结合则明显抑制TG在MPM中的增长，随TNFα剂量增高，其协同作用明显增强。

图1TNFα对IFNγ抗弓形虫作用的影响

Fig1The effects of TNFα on IFNγ-induced toxoplasmastatic activity in MPM

2.2IL-6促进TG在MPM内增殖及与IFNγ和TNFα的相互作用IL-6促进TG在MPM的内增殖作用与IL-6剂量呈依赖关系（见图2A）；IL-6能够部分逆转IFNγ诱导MPM的抗TG效应，其逆转作用随IL-6剂量增加而增强，但高剂量（400U／ml）的IL-6不能完全逆转IFNγ诱导的MPM的抗TG效应（见图2B），IFNγ处理MPM后12h，IL-6对IFNγ诱导的MPM的抗TG效应无明显影响（见图2C）；TNFα对IL-6促进TG在MPM内的增殖作用无明显影响（见图2D），但TNFα可部分恢复IL-6对IFNγ诱导MPM抗TG效应的逆转作用（见图2E）；在IL-6及IL-6和IFNγ处理的MPM中，加入抗TNFα抗体，再感染TG（见图2F），抗TNFα对IL-6引起的TG增殖作用无影响，但可增加IL-6对IFNγ诱导MPM抗TG效应的逆转作用。

图2IL-6促进弓形虫在小鼠腹腔巨噬细胞内的增殖及其对IFNγ抗弓形虫作用的影响

Fig2The effects of IL-6 on toxoplasma gondii growth and IFNγ-induced toxoplasmastatic activity in MPM

2.3IL-4对MPM抗TG效应的影响在TG感染前24h及感染后应用100U／mlIL-4（见图3A），IL-4100U／ml时能够诱导MPM抗TG效应，但作用不如IFNγ，随IL-4剂量增加，IL-4诱导MPM抗TG效应增强，200U／ml即达高峰，（见图3B）；IL-4和IFNγ共同处理MPM表明（见图3C）两者具有相加作用；在IL-4、IFNγ处理MPM同时加入抗TNFα抗体（见图3D），抗TNFα对IL-4诱导的MPM抗TG活性无明显影响。

图3IL-4对小鼠腹腔巨噬细胞抗弓形虫作用的影响

Fig3The effects of IL-4 on IFNγ-induced toxoplasmastatic activity in MPM

2.4IL-2在小鼠抗TG感染中的作用实验组自1×10²个TG感染前2d至感染后第4d（－2，－1，0，＋1，＋2，＋3，＋4），每天腹腔注射100U／mlIL-2（0.1ml），共700U，对照组小鼠注射等量PBS（见图4A，B），结果显示，对照组平均生存时间为9.2±1.2，而实验组为14.1±1.2，两组相比差异显著；在观察IL-2对急性TG感染小鼠脾细胞杀伤活性的影响的实验中，在TG感染小鼠第－2，－1，0，＋1，＋2d，实验组小鼠每只每次注射100UIL-20.1ml，对照组注射等量的PBS，感染后第3d测小鼠脾细胞杀伤肿瘤细胞及TG感染的自身脾脏淋巴母细胞的能力（见图4C），IL-2治疗组的杀伤肿瘤细胞及TG感染自身细胞的能力均<