摘要：目的 探讨抗体产生细胞在生殖道的的归巢。方法 用分泌抗LDH-C4 IgG抗体的单克隆杂交瘤细胞SG2和分泌抗LDH-C4 pIgA抗体的单克隆杂交瘤细胞PA4标记后注入同系小鼠体内，36h后取材，以相对分布指数（RDI）表示其归巢水平，检测了细胞在部分淋巴结、肠、两性生殖道等器官的分布水平。结果 SG2和PA4细胞可以归巢在生殖道各部分，但在雌性生殖道各部分的归巢水平比雄性生殖道分布水平高，雌性生殖道平均RDI值显著高于雄性生殖道平均RDI值，而非生殖器官雌雄间差异不显著。二者在所有被检器官的归巢水平均无显著性差异。结论 分泌抗体的杂交瘤细胞SG₂和PA₄可以归巢在雌雄生殖道，二者归巢水平无显著性差异。

道

中图分类号：R392.1文献标识码：A

Homing of hybridoma cells secreting pIgA and IgG against LDH-C4 to genital tracts

ZHAO Xu-dong，BEN Kun-long，WANG Yu-qi，CAO Xiao-mei，WANG Xiao-lei

（Kunming Institute of zoology，Chinese Academy of Science，Kunming 650223，China）

Abstract：Objective In order to understand the homing of the monoclonal hybridoma cells secreting IgG or pIgA to the male and female genital tracts．Methods We intravenously injected³H-methy-thymidine-labelled splleen-derived SG2 and Peyer′s patch-derived PA4 hybridoma cells into male and female mice．Thirty-six hours after injection，the relative distribution index（RDI）in genital tracts，trachea，duodenum，as well as some lymph nodes were calcuated．Results SG2 and PA4 cells in blood can migrate and home to male and female genital tracts．The value of RDIs is significantly higher in genital tracts than in other organs in female mice．RDIs in female tracts are also significanthy higher than in male′s while RDI in other organs between male and female has no significant difference．The RDIs between SG2 and PA4 in all of the organs detected have no significant difference．Conclusion Hybridoma cells secreting IgG or pIgA can migrote into and home to male and female mouse genital tracts．There is nodifference between SG2 and PA4．

Key words：Ig-producing cell；homing；genital tracts▲

免疫细胞在生殖道的游走和归巢与其免疫力水平及生理病理状态密切相关，在免疫避孕、性传播疾病防治等方面具有重要意义。已有的研究表明粘膜免疫部位细胞的游走和归巢有着其特殊的规律^［1～3］。然而，对成熟的抗体产生细胞是否可以归巢在雌性生殖道和雄性生殖道各部分还不清楚。为了弄清血液中的抗体产生细胞是否可以归巢在生殖道，我们用NS-1细胞和B淋巴母细胞融合得到的单克隆杂交瘤细胞标记后进行了归巢实验。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1动物：8周龄Balb／c纯系小鼠购自中科院上海实验动物中心，在本室动物房饲养。

1.1.2试剂：用从小鼠睾丸提取的LDH-C4免疫小鼠，制备单克隆杂交瘤细胞，SG2由NS-1和来源于脾脏的IgG产生细胞融合获得，PA4由NS-1和来源于Peyer′s结的多聚IgA产生细胞融合获得^［4］。RPMI1640培养基购自Gibco公司，³H-thymidine购自Amersham公司。

1.2方法

1.2.1细胞培养及标记：将冻存细胞复苏后，在37°C，5％CO2，湿饱和条件下培养。在³H-thymidine掺入时，收集处于对数生长期的细胞，调节浓度为5×10⁶／ml，加入³H-thymidine至终浓度为1μCi／ml，37°C孵育2h后洗涤，重悬后尾静脉注射给小鼠10⁶／（0．5ml^.只）。

1.2.2取材时间的确定：注射标记细胞后，在12、24、36、48、60h取材，计算RDI值。在24～60h之间，各器官RDI值水平波动较小（数据未列出），选择36h作为取材时间。

1.2.3液闪计数：断颈处死动物后，取生殖器官（雄性取睾丸、附睾（附睾头、附睾体、附睾尾）、前列腺、凝结腺、精囊腺、输精管及阴茎，雌性取卵巢、输卵管、子宫（子宫角、子宫颈、子宫体），其他粘膜器官（气管、十二指肠）以及淋巴结（派伊尔氏结、腋下淋巴结、肠系膜淋巴结和髂淋巴结）和脾。所取组织称湿重。将组织块加入50μl发烟硝酸，在沸水浴中消化，0.5后加入100μl H₂O₂，脱色0.5。然后加入5ml闪烁液，混匀、遮光保存48h测dpm值。

1.2.4数据处理：以公式RDI＝10⁵×A／（B×C）计算标记细胞在各组织内的相对分布指数（relative distribution index），其中A代表所测得的器官放射性强度（dpm），B代表标记后0．5ml细胞悬液的放射性强度，C代表器官所取部分的质量。统计分析采用非配对t检验进行。

2结果

2.1SG2和PA4细胞在雄性小鼠各组织中分布的RDI值水平见图1。在所有被检器官，SG2和PA4细胞的RDI值均无显著差异（P＞0．05），两种细胞在淋巴结、脾和十二指肠中RDI水平较高，而在肝、肺和气管中RDI值较低。在雄性生殖道各部分RDI值均较低。

2.2SG2和PA4细胞在雌性小鼠各组织中分布的RDI值水平见图1。与雄性小鼠一样，雌性小鼠各被检器官SG2和PA4细胞RDI值均无显著差异，非生殖道组织的RDI值都较高；然而雌性生殖道内两种细胞的分布水平与非生殖道器官的分布水平差别不大。

图1雌雄小鼠各器官细胞相对分布指数（RDI）

Fig1Relative distribution index in normal male and female mice

M：mean of RDI in genital organs of either male or female；axi：axillary lymph node；mes：mesentery lymph node；pey：peyers patch；ili：ilial lymph node；spl：spleen；lun：lung；tra：trachea；duo：duodenum；cap：caput epididymidis；cor：corp epididymidis；cau：cauda epididymidis；vas：vas deferens，pen：penis；cog：coagulating gland；sem：seminal vesicle；pro：prostate；liv：liver；fal：fallopian tube；hor：horn of uterus；ute：uterus；utc：cervix of uterus；vag：vaginal：rec：rectum

2.3两种细胞在雌性和雄性小鼠RDI值的比较 在雌性和雄性小鼠所有被检组织中，PA4和SG2细胞RID值基本一致，二者之间无显著差异。雌雄小鼠非生殖道组织的RDI值较高，且雌雄间无显著差异。但雄性生殖道的归巢水平很低，其平均RDI值显著低于所取的非生殖道组织的平均RDI值（P＜0．01），也显著低于雌性生殖道组织（P＜0．001）。

3讨论

本研究采用分泌抗精子特异抗原LDH-C4抗体的杂交瘤细胞，雌性体内无此抗原表达，雄性由于存在血睾屏障，此抗原无法进入所取组织，避免了外来抗原以及体内的某些抗原对实验结果的影响。使用细胞来源于实验所用小鼠品系，避免了细胞注入体内后受到免疫排斥，理论上说，这些细胞甚至可以在体内增殖，但这不会影响使用放射性强度代表细胞分布水平的准确性。杂交瘤细胞是由正常细胞和瘤细胞系融合而成，在归巢性质上可能兼具两个亲代细胞的特征，不一定能全部反应正常淋巴细胞的归巢性质。然而由于单克隆细胞避免了细胞亚类、细胞发育时期和抗原特异性等因素的影响，因此一直是淋巴细胞归巢及其分子机制研究的重要手段之一^［5～7］。在评价细胞归巢水平时，采用相对分布指数（单位质量组织内放射性与所注入的细胞总的放射性的比值），使从不同个体、不同批次动物得到的数据可以相互比较。

粘膜免疫系统是机体免疫系统的重要组成部分，是机体对病原微生物等外来抗原的第一道防线，其IgA／IgG水平明显高于系统免疫系统。一般认为，粘膜免疫部位的淋巴细胞来源于肠相关淋巴组织，但也有例外，如大鼠乳腺中的IgA产生细胞与小肠中IgA产生细胞并非同一来源^［8］。生殖道是粘膜免疫系统的主要部位之一。虽然血液内的抗体可以转运到生殖道，但生殖道及其分泌物内抗体主要是由生殖道局部的抗体产生细胞分泌的。然而，对于这些细胞的来源却并不清楚，特别是缺乏对整个生殖系统的系统研究。推测应该有两种可能，一是成熟B细胞在生殖道受抗原刺激后，增殖分化为浆细胞，另一种是细胞在其他部位受抗原刺激，分化为浆细胞后通过血液和淋巴归巢在生殖道，或者是二者皆有。以前的研究表明，其它粘膜部位的IgA浆细胞前体细胞可以游走并归巢在子宫和阴道^［9］。然而淋巴细胞不同亚类以及在其不同发育阶段，归巢性质都不尽相同^{［2，10，11］}