军事医学科学院院刊2000年第24卷第2期

张伟京陈喜林江民董陆佳陈虎俞受程

关键词：CD34；造血干细胞；净化；自体造血干细胞移植；MACS装置

大剂量放疗化疗结合自体外周血造血干细胞移植(APBSCT)是治疗高危组恶性淋巴瘤的有效方法，这是近年来治疗学上的一大进展；但是恶性淋巴瘤易侵犯骨髓，瘤细胞也难免释放入外周血，行APBSCT时有可能将少量肿瘤细胞回输给预处理后的患者，从而增加患者复发的机会。CD34⁺细胞是造血干细胞的表面标记，而瘤细胞常常无此表面标记。CD34⁺细胞富集仪利用此特性清除瘤细胞，达到净化外周血的目的。我院自1999年1月开始使用CD34⁺细胞富集仪并获得成功，现报道如下。

1临床资料及治疗方法

患者，男性，23岁，1997年7月出现右颈部肿块，无发热、盗汗和体重下降。外院检查其他部位未见肿块，活检病理报告为霍奇金淋巴瘤结节硬化型。诊断为霍奇金淋巴瘤，结节硬化型，I_A期。行COEP(5周期)和COPP(1周期)化疗，达CR。休息2个月后局部复发，随即行CHOP方案化疗1周期，并行右锁骨上区及纵隔放疗，D_T50 gy，达PR，后行化疗COEAP方案2周期，达CR。1998年10月右腋下和右胸壁复发，1999年1月在本院就诊，体检：KPS评分90分，右腋下和右胸壁分别及一3 cm×4 cm和4 cm×4 cm大小的肿大淋巴结，未见其他异常。决定行APBSCT。给予卡莫司汀125 mg，d 1～3，表柔比星 100mg，d 8，长春花碱酰胺 6 mg，d 15，化疗后肿瘤进一步缩小。

1.1外周血干细胞 (APBSC) 动员方案及分离

皮下注射 G-CSF 150 μg， 2次/d，d 1～5。d 5～6行外周血干细胞分离2次。采用CS-3 000 plus型血细胞分离机进行外周血干细胞的分离。每次分离10000 ml外周血。分离的细胞经梯度降温后置于液氮中保存。

1.2APBSC的净化

分离后，将分离液体置于CliniMACS系统中进行净化。该系统通过单克隆抗体将CD34⁺细胞特异性地选出，而其他细胞（包括肿瘤细胞）均被抛弃，从而达到净化干细胞悬液的目的。经上述处理后，CD34⁺细胞的比率由原来的1.52%提高到98.4%，是处理前的64.7倍。而CD34阴性细胞由98.48%降低到1.6%，CD34⁺细胞总数富集前为4.38×10⁸，富集后为2.51×10⁸，回收率为57.31%。但是CD34^-液和清洗液中仍有少量CD34⁺细胞，其含量分别是0.1%和32.9%，净化后的细胞悬液置于液氮中保存。

预处理方案：卡莫司汀 250 mg/d，d 1～3；依托泊苷300 mg/d，d3～5；环磷酰胺 1.0 g/d，d 5～7。

干细胞的回输：化疗后24 h开始回输干细胞。回输单核细胞3.04×10⁶/kg，CD34⁺细胞2.99×10⁶/kg。

造血恢复情况：回输后d 7外周血白细胞达最低，为0.4×10⁹/L，血小板15×10⁹/L。d 8恢复到白细胞1.0×10⁹/L，血小板 40×10⁹/L。d17血象恢复正常。

治疗中患者有轻度至中度消化道反应，主要表现为恶性呕吐、上腹部疼痛、食欲减退，经对症处理后好转。初期有乏力。全过程无感染征象，治疗顺利。

患者自预处理前1 d至外周血白细胞＞1.0×10⁹/L之日，移至层流病房。

治疗结果为PR。经胸壁补照电子线，D_T50 Gy/5周，近CR。

2讨论

CD34是造血干/祖细胞的的表面标记，利用这一标记，可以纯化造血干/祖细胞，减少瘤细胞的污染，以提高自体造血干/祖细胞移植的疗效。CliniMACS系统是一个CD34⁺细胞的纯化系统^［1］。其原理是将CD34单抗与极为微小的磁性颗粒相接，它与分离后的细胞悬液充分混合后，与CD34⁺细胞特异性结合，并使其具有磁性标记，在其通过磁柱时被分离出来，从而使得造血细胞得以保存。而肿瘤细胞常常是CD34阴性细胞，因此不会有磁性标记，从而与CD34⁺的造血细胞分开，由此干细胞悬液得到了净化。目前，这种净化方法已经应用于实体瘤的干细胞移植治疗^［2］。我们在治疗中发现，这种净化方法对骨髓重建没有明显不良影响，骨髓重建较快，患者较安全。文献报道此法可以使肿瘤细胞大大减少^［1～3］。这种减少肿瘤细胞污染的CD34⁺细胞移植可能延长患者的生存期，长期随访结果尚待观察。而且在进行这种富集处理前应获取足够的CD34⁺细胞数。

［作者简介］张伟京（1959-），男，北京人，副主任医师，硕士。

张伟京(军事医学科学院附属医院，北京100850)

陈喜林(军事医学科学院附属医院，北京100850)

江民(军事医学科学院附属医院，北京100850)

董陆佳(军事医学科学院附属医院，北京100850)

陈虎(军事医学科学院附属医院，北京100850)

俞受程(军事医学科学院附属医院，北京100850)

参考文献

［1］Schumm M,Lang P,Taylor G，et al.Isolation of highly purified autologous and allogeneic peripheral CD34⁺ cells using the CliniMACS Device［J］.J Hematother，1999，8（2）:209.

［2］Colter M,Jones M，Heimfeld S，et al.CD34⁺ progenitor cell selection: clinical transplantation,tumor cell purging,gene therapy,ex vivo expansion,and cord blood processing［J］.J Hematother，1996，5（2）:178.

［3］Handgretinger R,Lang P,Schumm M，et al.Isolation and transplantation of autologous peripheral CD34⁺ progenitor cells highly purified by magnetic-activated cell sorting［J］.Bone Marrow Transplant，1998，21（12）:987.