关键词: 生物药物， 生物工程药物， 化学成分分析， 生物活 性鉴定

摘要从生物药物的概念、来源、种类及前途等方面着手 ，根据国际通用及WHO的有关法则，依据国家的有关规定，参照有关同类药品的质量标准对 生物药物的检定进行了较系统的论述。

中图分类号R927

Quality Control of Biopharmaceutics

Song YuanzhiHu Xiaoge

（Shanxi Institute for Drug Control Xian 710061）

以生物技术为特征的生物制药是近10年来发展最快的高新技术产业之一。 它的出现给药物的生产带来了一场革命，推动了整个药业的发展。世界药品市场结 构在未来10年内将发生重大变化，生物技术药物将异军突起，向大规模产业化和一些新领域 发展，与化学药物和中药三足鼎立，有效地为人类健康服务。据不完全统计，我国已 有约10个基因工程药物批准生产，另有十余个产品正在进行临床研究^［1，2］。预测 2000年世界畅销生物药物将达240亿美元，平均年增幅为12.5%^［3］。

生物技术是将某一特定编码的天然或合成的核苷酸序列，利用有高度特异性的限制性内切酶 和连接酶插入到质粒、病毒等载体中，形成重组的遗传物质，然后再把带有遗传物质的载体 转移到宿主细胞使其增殖和表达。影响外来基因在新宿主细胞中表达的因素是复杂的，不同 的培养条件与不同的提纯方法等均会影响最终产品的质量。因此生物技术产品可能含有用传 统生产方法不可能存在的有害物质，所以这类产品的质量控制与传统方法生产的产品有本 质的差别。鉴于这类产品生产工艺的特殊性，除检定最终产品外，还需从基因的来源及确证 、菌种的鉴定、原始细胞库等方面提出质量控制的要求，对培养、纯化等每个生产环节严格 控制，才能保证最终产品的有效性、安全性和均一性。为此有些国家，如美国、日本等已 制订出生物技术 产品质量控制要点、标准和管理方法。1991年WHO颁发了“用DNA重组技术 生产药品和生物制品的质量保证指南”；1990年我国制定了“人用重组DNA制品质量控制要 点”和“基因工程人α型干扰素制备及质量控制要点”。依据上述“要点”及新药申报的规 定，下面重点介绍生物技术产品成品检定的一些情况。

1检验的基本内容^［4，5］

1.1连续一致性

应对可以接受的批数，例如连续5个批号的检品尽可能全面地进行鉴定，以确定其组分的连 续一致性。各批次间的任一差异均应重视，该试验的结果应作为制定产品标准规格的依据。

1.2同一性

每批产品都必须有鉴别纯化活性物质试验来证实产品的同一性。鉴别试验的选择取决于产品 的性质和生产方法。

1.3纯度

应测定每批成品的纯度，并应规定范围。宿主细胞DNA残量测定必须用灵敏度高的方法进行 ，对于长期或大剂量使用的产品应规定残留的微量抗原性成分的限度。

热原和无菌检查等应符合制剂的要求。

1.4效力

采用国家或国际标准品作对照，测出产品的生物效价。如化学方法或体外试验方法与生物试 验方法平行，亦可选用体外法或化学法。如无标准品时，可选用经过批准的内部参照品进行 标定。采用的标准品，必须是经过临床评价的，在化学组成、纯度及生物活性，包括全氨基 酸序列等方面都是全面鉴定过，且与天然纯品对比的制品。

总之，成品的检验应注意如下问题：(1)有效成分的同一性、结构确认；(2)有效成分的均一 性；(3)有效成分的化学纯度；(4)对有害物质及杂质等的有效控制试验；(5)灵敏高效适宜 的生物活性及比活性等实验方法^［6］。

2化学成分分析^［5，6］

主要包括蛋白质、糖链的构造，各种理化特性解析、确认、鉴定、均一性，纯度检定、定量 等。

蛋白质的构造、组成解析项目有：(1)氨基酸组成分析；(2)末端氨基酸及末端氨基酸序列分 析；(3)巯基和二硫链的数量和位置分析；(4)肽图分析；(5)全氨基酸序列分析；(6)高级结 构分析和分子量测定等。

所用分析方法有氨基酸自动分析、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、SDS-PAGE法和高效液相色 谱法(HPLC)等。也可将不同方法加以组合使用，会获得更好的分析结果。如HPLC-HPLC、HP LC-MS、HPLC-氨基酸自动分析、肽图-MS、肽图-氨基酸自动分析、肽图-氨基酸序列分 析等。

HPLC法和电泳法因其简便有效，所以在蛋白质的确认、鉴定、均一性检查、纯度检定及定量 方面的应用十分广泛。如HPLC法通过选择适当的色谱柱填充剂和流动相，可分析只有1个氨 基酸差别的肽链。用反相HPLC法测定肿瘤坏死因子(rh-TNF)的纯度，方法简便、准确、快 速，分离测定同时进行，可避免其它方法在测定时有其它蛋白成分干扰的现象，并使比活的 测定结果更为可靠^［7］。电泳法可区分不同的分子量、电荷，与免疫学方法联 用可大大提高试验的特异性。

近年来建立的高效毛细管电泳法(HPCE)，在蛋白质和肽类分离分析方面具有无法比拟的作用 。由于它具有用量少、分析时间短、分离效率高、自动化程度高等优点，特别适用于蛋白质 和肽类分离分析，它的应用使蛋白质分析水平上了一个新台阶^［8，9］。

糖蛋白类药物是近年来研究的热点之一，糖链的结构和机能研究受到人们的广泛关注。现 已知糖链有影响与靶细胞受体结合等诸多生物活性的调节和表达作用、增强与血浆蛋白质( 运输)的结合性、影响免疫学的特性等功能。因此，糖蛋白中糖链结构的鉴定十分重要，但 解析的步骤很复杂，主要包括(1)糖组成分析；(2)结构型分析(N还是O)；(3)唾液酸分子种 类分析；(4)链的分枝、大小、分布；(5)糖链结构解析；(6)糖链结构位置；(7)每个结合位 置的糖链分布、结合分析等。具体方法有：a.单糖分析：化学分析、GC、萤光标记-HPLC 法、强阴离子交换HPLC法等；b.糖链图(二维、三维)：用PA标记糖链的HPLC法、FACE法、C E法等；c.糖链结构：C¹³核磁共振法等。

3生物活性鉴定

生物活性测定目前主要用于鉴别、效价测定和比活性测定三个方面，鉴别试验是应用参照品 将rDNA制品与天然产品通过生物学试验比较，确定其与天然产品的一致性。效价测定是对产 品进行定量，比活性测定是检查产品的纯度。生物技术细胞因子产品大多采用活细胞方法来 判断其生物活性，这种方法设备要求较高，费时，有时实验变异度较大、有干扰现象。

近年来许多免疫学方法的建立，为快速、准确、灵敏地测定各种生物技术产品活性提供了极 大的方便。如现已有用ELISA和BA-ELISA、EIA、RIA等免疫学方法检测IL活性^［10］ ；也有用放射免疫法测定胰岛素的效价^［11］；用ABL-ELISA法测定干扰素的效价 ［12］。相信随着对各种生物技术产品的不断深入研究，各种检测活性的免疫药盒会不 断出现，将使其检测技术大为改观。

参考文献

1，洪晓顺，薛秀珍.国际现代生物技术发展趋势及我国发展现状简介.中国医药情报 ，1997，3(2)∶124～125

2，中国药学会生化药物专业委员会.生物药物国内外现状及展望.中国药学杂志，19 97，32(11)∶694～698

3，陶剑虹.我国医药市场品种结构分析.药学进展，1997，21(3)∶186～190

4，周海钧.基因工程医药产品的质量要求.药物分析杂志，1993，13(1)∶45～47

5，中国药品生物制品检定所生检处编.国内外生物技术产品质量控制要点，1993，

6，徐连连.生化药物及生物技术产品的新药申报.药物生物技术，1994，1(2)∶58～ 62

7，杨昭鹏，徐康森.反相高效液相色谱法测定重组人肿瘤坏死因子衍生物.药物分析 杂志，1997，17(1)∶22～24

8，张惠.高效毛细管柱电泳法对蛋白质和肽类分离分析新进展.药物分析杂志，1993 ，13(1)∶62～64

9，黄志东.高效毛细管电泳及其在生物物质分析中的应用近况.中国生化药物 杂志，1998，19(2)∶108～110

10，宋愿智，黎邦俊，董国华.白细胞介素的开发及前景.中国生化药物杂志，1 993，14(1)∶12～15

11，沈洪征，冷炜，彭新杰.人胰岛素免疫测定用国家标准品研制.药物分析杂 志，1997，17(3)∶156～159

12，王强.ABL-ELISA检测人天然和重组γ-干扰素.中华微生物学与免疫学 杂志，1994，14(1)∶58～60

收稿日期1999-07-13