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用引物YH1-YH2，YH7-YH8以PCR反应分别扩增20株肺炎链球菌标准株(0，1，2，3，4，5，6B，7F，8，10A，11A，12，14，15B，17F，19A，19F，20，23F，33型各1株)的自溶素和溶血素基因部分DNA片段，均能扩增出长度分别为354 bp和307 bp的靶DNA片段，分别经限制性内切酶TthHB81和ACCⅠ酶切后确认。检测其灵敏度，两对引物均可从10 fg的全细胞DNA中扩增出清晰的靶序列。而7株对照菌株(A组溶血性链球菌4株，金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌和大肠菌各1株)均未扩增出相应的DNA片段。
1998年12月～1999年6月间，应用此方法对临床诊断为肺炎、支气管炎的63例住院患儿进行检测。分别于入院当天采集咽拭子标本，于羊血琼脂平板中37℃培养48h，将28例出现溶血环菌落的标本分别用引物YH1-YH2、YH7-YH8进行PCR扩增，其中15例扩增出相应的DNA靶片段，确定为肺炎链球菌，13例阴性。与常规形态学、培养特性等鉴定结果完全一致。其它35例标本无典型溶血性菌落生长。
我们认为PCR法其特异性强、灵敏度高、操作简单，可为临床早期诊断提供较可靠的依据。
基金项目：甘肃省自然科学基金资助项目(ZS991-A23-073Y)
(收稿日期：1999-10-29)
