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制备目的基因片段和线状载体DNA的去磷酸化及1024bp目的基因片段和5.05kb载体的连接如常规方法进行。连接反应结束后，用1%琼脂糖凝胶分离，在胶上可明显看到以下DNA条带：1 024bpEGFR片段，5 050bp线性pBabe-puro载体和6 074bpEGFR重组载体条带，有时还可看到其它的DNA条带，很可能为自身环化的空载体DNA、二聚体DNA等，在紫外灯下小心切下6 074bpDNA条带，注意不要有空载体的污染，用QIAGEN DNA快速提取试剂盒提取纯化该重组DNA。如果在胶上不能明显看到所要的条带，可小心切下与其分子量大小相当的凝胶区分离纯化，然后转化细菌，可得到所要的菌落。若转化细菌后，无菌落出现，可重复连接反应。当用所纯化的DNA转化细菌，得到菌落后，可常规进行小规模质粒DNA的制备、酶切鉴定。结果显示60%以上的菌落均含有所要的目的基因的重组载体。此种方法简便易行，很容易获得需要的重组载体。
1997年12月2日收稿1998年1月26日修回
