摘要实验应用复合式肠内细菌群检测法，随机比较了中国大连地区和日本大阪地区6名健康成年人(简称：CA，JA)及4名老年人(简称：COM，JOM)的肠内细菌群结构。CA肠内细菌总数为10.21±5.56(每克粪便中的对数值)，较JA的肠内细菌总数10.87±2.45低，但统计学检查差异不显著；CA的双歧杆菌数为9.01±0.13，JA的双歧杆菌数为9.98±1.24，统计学检查表明差异显著，而且，JA的双歧杆菌占有率为12.88%±3.45%明显高于CA的6.29%±4.55%，统计学检查差异显著。CA的乳酸菌数为5.45±1.12，JA的乳酸菌数为5.52±1.44；在腐败梭菌的菌数上，CA为6.45±2.21比JA的5.22±2.45略高，但统计学检查差异不明显。

COM肠内细菌总数为10.45±4.66，较JOM的肠内细菌总数10.97±5.25低，但统计学检测差异不显著；COM的双歧杆菌数为8.74±2.13，JOM的双歧杆菌数为9.85±0.34，统计学检查表明差异显著，而且，JOM的双歧杆菌占有率为7.59±5.15%明显高于COM的1.13%±0.25%，统计学检查差异显著。COM的乳酸菌数为6.75±2.18，JOM的乳酸菌数为7.42±2.14；在腐败梭菌的菌数上，CA为7.15±2.12比JOM的6.44±3.25略高，但统计学检查差异不明显。上述结果表明，本次随机检测的中国大连地区健康成年人的肠内细菌群结构比日本大阪地区健康成年人的结构稍差，主要表现为肠内有益菌少，所占比例低。中国大连地区健康老年人的肠内细菌群结构比日本大阪地区健康老年人的结构稍差，主要表现为肠内有益菌少，所占比例低。大连地区和大阪地区的地理特征基本相同，因此，调查两地人群肠内细菌群结构的差异，对疾病预防及健康保健都具有十分重要的意义。

THE STUDIES IN COMPARISON OF INTESTINAL FLORA BETWEEN HEALTHYCHINESE AND JAPANESE ADULTS AND AGED PERSONS RENDOMLY

Li Xuetuo.Insititute of Dalian Physics Chinese academy of sciences.116023

AbstractThe experiment compared the intestinal bacteria composition of the random samples of 6 healthy adults who are from Dalian China and Japan(abbreviation:CA,JA) and 4 aged persons who are also from Dalian China and Japan(abbreviation:COM,JOM) respectively with the help of composite intestial bacteria inspection method.(1)The total intestinal bacteria number of CA is 10.21±5.56(logarithm value of bacteria number per gram of stool),the Bifidobacteria number of CA is 9.02±0.13,the Bifidobacteria number of JA is 9.89±1.24;the statistical inspection is obvious.(2)Moreover,the percentage of JA's Bifidobacteria number is 14.23±3.45%,which is clearly higher than CA's 8.42±4.55%;the statistical inspection is obvious.The CA's number is 6.45±2.21,which is higher than that of JA's 5.22±2.45;while the statistical inspection is unobvious.(3)The COM's total intestinal bacteria number is 10.45±4.66,which is lower than that of JOM's 10.37±5.25;the statistical inspection is unobvious.The COM's Bifidobacteria number is 8.22±2.13,while that of JOM is 9.65±3.34;the statistical inspection is obvious.(4)Moreover,the percentage of JOM's Bifidobacteria is 6.45±5.15%,which is obviously higher than that of COM's 1.12±0.25%;the statistical inspection is unobvious.The above results indicate that the intestinal bacteria composition of China Dalian's healthy adults and aged persons has some discrimination between that of Japan's healthy adults and aged persons.The discrimination mostly displayed in that the unmber of useful intestinal bacteria of Chinese person is small and their percentage is low.

Key wordsIntestinal flora Healthy persons

工业化革命之后，世界经济高速发展，人们的生活习惯、饮食习惯正发生不断的变化。与此同时大肠癌、乳腺癌、心脏病的发病率不断上升，特别是在欧美等经济发达国家，上述疾病发生率的上升更是十分迅速。高脂肪低纤维的食物结构是引发上述问题重要原因^{［1，3，7］}，“肠内细菌群”在二次胆汁酸的转化、硝酸盐的代谢等上都具有重要作用。如果“肠内细菌群”的结构长期不良，腐败菌增加而双歧杆菌等有益菌减少，上述疾病的发生率将上升。

“肠内细菌群”因饮食习惯、生活习惯和人种的不同而有差异，日本本土居民移居到夏威夷岛后，常出现“肠内细菌群”结构变化，随之大肠癌及与美国本土居民相同的几种高发疾病的发病率亦升高。一些调查表明，这些人移居到夏威夷岛后，饮食结构改变，高脂肪高蛋白的食品慑入量剧增，纤维摄入量剧减。肠道中的双歧杆菌等有益菌数比移居前减少，腐败梭菌及肠道内的腐败物质增加。日本本土居民同加拿大居民的大肠癌及乳腺癌的发生率相差很大，调查两地居民“肠内细菌群”的结果表明结构差异很大，主要表现在双歧杆菌等有益菌的数量和占有率、腐败菌数量上的不同。同样还有许多调查支持了这一观点，就是生活习惯、饮食习惯、人种的不同，“肠内细菌群”的结构是不一样的。

然而，同人种、地理特征基本相同，饮食结构也以稻米等为主的不同国度、不同地域人群的“肠内细菌群”结构如何，是本次实验研究的主要目的。通过随机比较中国大连地区和日本大阪地区健康成年人及老年人肠内细菌群结构以求对上述问题做一些探索。

1材料与方法

1.1材料

随机在中国大连地区和日本大阪地区抽取6名健康成年人(平均年龄：30岁～35岁)(简称：CA，JA)和4名健康老年人(平均年龄：65岁～70岁)(简称：COM，JOM)的新鲜粪便。

1.2方法

肠内细菌群的检测依据复合式法^［6，9］进行如表1所示，非选择性培养基和选择性培养基联合使用。称取粪便2克，加入18ml厌氧稀释液(盐类溶液Ⅰ(0.78% K₂HPO₄)37.5ml、盐类溶液Ⅱ［0.48%KH₂PO₄，1.18% NaCl,1.20%(NH₄)₂SO₄，0.12%CaCl₂,0.25%MgSO₄^．H₂O］、0.1%Resazurin 1ml)37.5ml、L-Cysteine HCl^．H₂O0.5g、25% L-Ascorbic acid 2ml、8% Na₂CO₃50ml、蒸馏水860ml］中，在吹入二氧化碳气体的同时混和。这一10^-1的稀释液做为原液以10倍梯度阶段稀释，然后选取适当的浓度每0.05ml用无菌L型玻璃棒涂抹在 各使用的培养基1/3或1/4区域上。使用的4种非选择性培养基是Modified medium 10培养基［Trypticase 2g.Yeast extract 5g、Glucose 0.5g、Cellobiose 0.5g、 Soluble starch 0.5g、 Agar 18g、0.01% Hemin solution 10ml、 VFA solution 3.1ml (CH₃ COOH 17.0ml、Propionic acid 6.0ml、n-Butyric acid 4.0ml、iso-Butyric acid 1.0ml、n-Valeric acid 1.0ml、 iso-Valeric acid 1.0ml、DL-α-Methyl Butyric acid 1ml)、Salt solution Ⅰ, Ⅱ(同稀释液)37.5ml pH6.8］、Eggerth-Gagnon(EG)培养基(Proteose peptone No.3 10g、Yeast extract 5h、Na₂HPO₄ 4h、Glucose 1.5g、Soluble starch 0.5g、 L-Cystine 0.2g、L-Cysteine^．HCl^．H₂O0.5g、Agar 15g、 Lab-lemco powder 2.4g、脱纤维马血液50ml,pH7.7)、Glucose blood liver(BL) 培养基(Lab-lemco powder2.4g、Proteose peptone No.3 10g、Tripticase 5g、 Phytone 3g、 Glucose 10g、 Yeast extract 5g、 Soluble starch 0.5g、Tween 80 1g、 L-Cysteine^．HCl^．H₂O 0.5g、Agar 15g、Liver extract 150ml、 Saltsolution A(10% KH₂PO₄,10% K₃HPO₄)10ml、 Salt solution B(4%MgSO₄,0.2%FeSO₄,0.2%NaCl,0.13%MnSO₄)5ml、脱纤维马血液50ml、蒸馏水780ml pH7.2)及添加脱纤维马血液的Trypticase soy(TS)培养基(BBL)。使用的11种选择性培养基是Bifidobacterium selective(BS)培养基［在BL培养基中加入5ml BS溶液(0.1%Paromomycin sulfate、0.4% Neomycin sulfate、30% Sodium propionate、6% Li Cl］、Eubacterium selective(ES)培养基［在EG培养基中加入5ml ES溶液(30% Sodium propionate、4% Streptomycin sulfate、2% Paromomycin sulfate、0.02% Polymyxin sulfate B)］、Neomycin^．brilliant green^．taurocholate (NBGT) 培养基［在EG培养基中加入2ml NBGT溶液(5% Sodium taurocholate、0.005% Brilliant green、1% Neomycinsulfate)］、Neomycin^．Nagler (NN) 培养基［40g Peptone、5g Na₂HPO₄、1g KH₂PO₄、 2g NaCl、 0.1g MgSO₄、 4g Glucose、25g Agar、100ml 卵黄溶液(50%)、10ml Neomycin sulfate(2%)、900ml蒸馏水、pH7.6］、Modified Veillonella selective (VS) 培养基(5g Trypticase、3g Yeast extract、0.75g Sodium thioglycolate、 1g Tween 80、 15g Agar、0.001% Brilliant green、25ml 50% Sodium lactate、 0.03% Cl eandomycin、50ml 脱纤