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关键词；胎盘解脲脲原体感染妊娠
解脲脲原体（Ureaplasma urealyticum简称Uu）是人类泌尿生殖道较常见的病原体，妊娠期Uu感染可引起不良的妊娠结局。本文主要探讨胎盘Uu感染与胎膜早破、早产、羊水性状、新生儿感染等的关系。
1材料与方法
1.1检测对象1997年6～12月在北京天坛医院产科分娩的产妇304例，产妇年龄为20～38岁，平均年龄为26岁。孕周为36～42周。其中剖宫产分娩58例，自然分娩246例。产妇无吸烟史及糖尿病史。
1.2标本的收集产妇分娩出胎盘后，立即取1.0cm3的胎盘组织，放入装有2ml胎盘运输液的无菌塑料管中，4℃冰箱保存24～48h内送研究室进行胎盘Uu培养及PCR检测。
1.3胎盘标本的Uu分离培养将胎盘标本放入无菌玻璃研磨器中研磨后，吸取0、2ml匀浆加入1.8ml uu液体培养基（本室自配）后，再进行一次10倍稀释。将此两个稀释度的试管置37℃孵育18～48h,当培养基逐渐由黄色变为粉红色时,将其转种于Uu固体培养基,37℃孵育24～48h,观察菌落生长情况。Uu菌落为黄褐色、圆形或不太规则的圆形,大小不等,内部有布纹样结构,有的菌落周围可见很薄的透明区环绕,似煎蛋样。出现Uu菌落者为Uu阳性,未见菌落者为阴性。
1.4胎盘Uu培养液的PCR检测采用Cybersyn公司提供的U4、U5两条引物，引物核酸序列如下：
U4：5－CAA TCT GCT CGT GAA GTA TTA C－3
U5：5－ACG ACG TCC ATA AGC AAC T－3
PCR循环程序为：95℃预变性5min后，进行95℃变性1min、55℃复性1min、72℃延伸1min，共35个循环后，72℃延伸7min。TaqDNA聚合酶、dNTP等由华美生物工程公司提供，以U8标准株为阳性对照模板（首都儿科研究所），对116例胎盘培养液进行PCR检测，其阳性扩增产物应为429bp［1］。
2结果
2.1Uu培养结果304例胎盘标本中，93例分离培养出Uu，阳性率为30.59%。Uu阳性的胎盘中，剖宫产占15%，Uu阴性的胎盘中，剖宫产占20%，自然分娩和剖宫产之Uu感染率无显著性差异（P＞0.05）。
2.2PCR灵敏度试验采用本实验所用PCR系统对U8标准菌株进行检测，U8标准菌株培养物变色单位（CCU）为10-4，对其进行10-1、10-2、10-3、10-4稀释，用此PCR法可检测出10-3稀释度的U8培养液。
2.3PCR检测胎盘培养液的Uu用PCR法共检测胎盘标本116例，其中Uu阳性者89例（含1例培养过程中有污染标本），检测阴性标本27例。
2.4PCR与培养法的符合率 89例PCR阳性标本中有88例胎盘培养阳性，1例因标本污染，培养未出结果；27例PCR阴性标本中有2例胎盘培养阳性，25例胎盘培养阴性。PCR与培养法的符合率为97%。
2.5妊娠结果随机取前155例孕妇进行临床观察，其中胎盘Uu培养阳性组53例,阴性组102例。
2.5.1胎膜早破胎膜在产程开始之前破裂者，称为胎膜早破。本组病例中胎膜早破18例，其中Uu阳性12例，占Uu阳性组22.64%，含剖宫产6例。Uu阴性6例，占Uu阴性组5.88%。两组相比有极其显著性差异（P＜0.01）。
2.5.2羊水性状155例中有29例羊水呈黄绿色或混有胎粪。Uu阳性组占13例（24.53%），Uu阴性组占16例（15.69%），两者无显著性差异（P＞0.05）。
2.5.3早产妊娠在28～37周之间终止者为早产。本组病例共有早产16例，Uu阳性组9例（17%），阴性组7例（6.86%），两组差异无显著性（P＞0.05）。
2.5.4新生儿感染对出生42天的新生儿进行随访，Uu阳性组共随访44例，有各种感染者8例，占18.18%。其中生后不明原因发热2例，体温37.5～38.5℃，持续48h以上；脐炎1例；生后20天左右患新生儿肺炎3例，均入院治疗7～10天好转；上呼吸道感染1例；新生儿重度黄染1例，总胆红素366μmol/L，20天后好转。阴性组随访83例，有各种感染者4例，占4.82%。其中发热1例、上感1例、肺炎1例、新生儿黄疸1例。Uu阳性组与阴性组感染率相比有显著性差异（P＜0.05）。
另外，Uu阳性组还有生后42天内发育营养差、生长缓慢者2例；多发畸形1例，表现为狼咽、睾丸未降、反应低下、不能吸吮等。阴性组未出现此种病例。
3讨论与结论
Uu被认为是引起妊娠感染的病因之一，可导致不良的妊娠结局。国外报道，Uu在胎盘中的出现与胎膜早破、自然流产、早产、低出生体重、宫内发育迟缓及围产期发病率和死亡率有关［2］。
3.1胎盘Uu感染的检测本组胎盘标本Uu感染率为30.59%，与我们以往所测胎盘Uu阳性率［3］及国外报道胎盘Uu感染率基本相符。
传统的Uu检测方法为Uu培养法，Uu在液体培养基中生长速度较快，一般在48h内就可发生颜色改变，但Uu的阳性诊断要以看到Uu菌落为准，Uu在固体培养基上生长的菌落不易观察，且受液体培养时间及Uu生长的速度的影响较大，故有些标本较难鉴定。
本实验所用PCR法参考了国外文献，反复摸索条件，建立了较稳定的PCR检测Uu的方法。此方法的敏感性、特异性均可。除1例污染标本PCR检测出Uu外，其余PCR检测阳性，Uu胎盘培养均阳性。2例胎盘培养阳性的标本PCR未测出Uu，考虑为标本处理不够、DNA模板不能充分暴露所致。
由于本PCR法检测的Uu阳性率与培养法基本相符，借鉴这两种方法的优点，建议在进行组织培养检测时，采用Uu液体培养法与PCR法结合的方法，这样可以既迅速又准确地作出是否存在Uu感染的判断，以指导临床治疗。
3.2Uu感染与新生儿宫内感染本组病例中剖宫产与自然分娩者的胎盘Uu阳性率之间无明显差异，与以往实验结果相同，支持分娩时产道污染对胎盘Uu感染不起决定作用，大多数胎盘在宫内已感染Uu的观点，即Uu在分娩前可通过胎盘屏障感染胎盘和胎儿。
3.3胎盘Uu感染与胎膜早破国外报道，胎膜早破和分娩间隔时间不同，胎膜的支原体分离率也不同。分娩前破膜48h以上的胎盘，其Uu的分离率为67%；分娩前24～48h内破膜的胎盘Uu分离率为23%（P＜0.001）；而在破膜24h内分娩的胎盘的支原体分离率只有10%（P＜0.001）［2］。
本组病例Uu阳性组之胎膜早破发生率较Uu阴性组明显升高（P＜0.01），说明胎膜早破大大增加了Uu由产道上行性感染的机会，也直接增加了Uu感染胎儿的机会。但Uu阳性组12例胎膜早破病例中有6例为破膜后立即行剖宫产手术者，不排除Uu已在宫内感染，且对胎膜起了一定的破坏作用。
3.4胎盘Uu感染与新生儿感染国外近10年的报道表明，Uu是重要的新生儿病原，尤其在血流、呼吸道和中枢神经系统的感染较为突出。国外已从患肺炎的新生儿的血液、肺组织、肺分泌物、胸膜液等分离出Uu。
Stagno［4］等对生后2～12周的新生儿肺炎患者的鼻咽吸出物进行Uu培养，38例中有8例Uu阳性，阳性率21%，正常对照组新生儿49例中2例Uu阳性，阳性率4%，两组差异较大。
Quinn PA［5］等对正常新生儿和呼吸系统疾病患儿用代谢抑制试验进行Uu抗体检测。正常组Uu阳性率2.6%（滴度≥1∶32为阳性），呼吸道感染组Uu阳性率55.6%（P＜0.01）。
本研究Uu阳性患儿新生儿感染率较Uu阴性组为高，且发现2例生后42天内发育营养不良、生长缓慢病例及1例多发畸形均在Uu阳性组，说明胎盘Uu感染对新生儿可产生一定的不良影响，可通过对感染新生儿进行血清学和培养方面的检测，来进一步证明。
3.5胎盘Uu感染与早产国外报道，随胎儿胎龄的增加，Uu在胎盘中的分离逐渐减少。Embree研究表明，孕38周以下分娩的胎盘Uu分离率为32%，对照组大于38周的分离率为9%（P＜0.001)。还有人报道孕龄28周以下新生儿80%Uu阳性，28～36周17.9%Uu阳性，因此认为Uu分离率与孕龄有密切关系。本研究中Uu阳性组早产儿占17%，阴性组占6.86%，阳性组比阴性组高，但无显著性差异，考虑为病例较少的缘故。
此外，Uu感染与羊水性状、产妇年龄、新儿性别等无明显关系。
3.6本研究表明，胎盘Uu感染（上行或/和下行）的存在，与胎膜早破、新生儿感染、早产等有一定相关性。为了搞好优生优育，特别是在治疗新生儿感染时，一定要注意Uu感染的存在。可以用Uu液体培养加PCR的方法，对Uu感染进行快速有效的早期诊断，以指导临床治疗。
孙红妹（首都儿科研究所北京，100020)
郭章溉（首都儿科研究所北京，100020)
吴广琴（北京天坛医院)
张景华（北京天坛医院)
